Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Nagy Béla Dr., Ph.D. IDE OEC Klinikai Biokémiai és Molekuláris Patológiai IntézetXIII-AS VÉRALVADÁSI FAKTOR „A” ALEGYSÉGÉNEK (FXIII-A) ÉS AP-SZELEKTIN RECEPTOR (CD62) EXPRESSZIÓJÁNAKÖSSZEHASONLÍTÓ VIZSGÁLATA THROMBIN AKTIVÁLTATHROMBOCYTÁK ÉS MIKROPARTIKULÁK FELSZÍNÉNVizsgálatunk célja az volt, hogy kimutassuk a thrombin aktiváltavérlemezkéken megjelenő FXIII-A és a thrombocyta aktivációs markerekfelszíni expressziójának kapcsolatát. A vérlemezkéket áramlási citométerrelkettős, illetve hármas felszíni jelöléssel analizáltuk, így detektálva a CD62, alizoszóma asszociált protein (CD63) és a FXIIIA egyidejű expressziójánakmértékét. Teljes vérben, nem aktivált thrombocytákon FXIIIA expressziót nemészleltünk, annak ellenére, hogy permeabilizált mintákban intracitoplazmatikusjelöléssel FXIIIA kimutatható volt. A felszíni FXIII pozitivitás értékefokozatosan nőtt egészen a 0,1 U/ml-es thrombin aktiválás hatására, amikor iselérte a 13,6%-os csúcsértékét. Az RGDS (Arg-Gly-Asp-Ser) tetrapeptidmintegy 70%-kal csökkentette ennek mértékét. FXIII „B” alegységére az összesaktivált minta negatívnak bizonyult. Annak megállapítására, hogy a FXIIIAhonnan kötődött a vérlemezkék felszínéhez, mosott thrombocyták expressziójátis vizsgáltuk. Ellentétben a teljes vérben végzett mérésekkel, a mosott, thrombinaktiválta thrombocytákon a FXIIIA expressziója szignifikánsan alacsonyabbnakigazolódott (2,5% versus 13,6%). A fényszórási tulajdonságuk alapján athrombocytákat 3 egyenlő nagyságú, különböző méretű vérlemezke populációraosztottuk fel. A FXIIIA expresszió mértéke a nagy thrombocyták felszínénadódott a legmagasabbnak (26%), míg a közepes és kis méretű thrombocytákon11%-os, illetve 6,6%-os pozitivitást detektáltunk. A CD62 expresszió értékejelentősen nem tért el a 3 populációban, valamint a FXIIIA pozitívthrombocyták több mint 80%-ban egyben CD62 pozitívak is voltak. Amikropartikulák (MP) mennyisége nőtt a thrombin aktiváció hatására, amelyekfelszínén a FXIIIA expressziója 0,1 U/ml-es thrombin koncentrációnál csak 5%-os pozitivitást ért el. Teljes vérrel, valamint mosott thrombocytákkal végzettvizsgálatok alapján megállapíthatjuk, hogy a vérlemezkék felszínéhez a plazmaszabad FXIIIA-e kötődik és mindez nem a thrombocytákból szabadul fel. Azexpresszió az RGDS peptid előzetes használatával gátolható és a különbözőnagyságú thrombocyták eltérő mértékben expresszálják a FXIIIA-t. Fentieredményeink alapján úgy gondoljuk, hogy az aktivált thrombocyták és MPfelszínén expresszálódó FXIIIA jelenlétének (patho)fiziológiai jelentősége leheta thrombus képződés, illetve stabilizálódás folyamatában.Témavezető: Dr. Kappelmayer János