2005 BSc - Orvosi laboratóriumi és képalkotó diagnosztikai ...
Share Embed Flag
Download ePaper

2005 BSc - Orvosi laboratóriumi és képalkotó diagnosztikai ...

2005 BSc - Orvosi laboratóriumi és képalkotó diagnosztikai ... 2005 BSc - Orvosi laboratóriumi és képalkotó diagnosztikai ...

olkda.med.unideb.hu
from olkda.med.unideb.hu More from this publisher
13.07.2015 Views

„Mikroszkópos technikák”1. Előadás (2 óra): A leképezéshez/képalkotáshoz alkalmazott sugárzások: elektromágneses sugárzások (látható fény,Röntgen-, gamma-sugárzás, UV-sugárzás, stb.); elektronsugárzás; lézer; Röntgen-fluoreszcencia. A fény kettős (részecske,hullám) természetéről.Az optikai képalkotás eszközei, törvényszerűségei és hibái (optikai törőközeg: lencse, törésmutató, sugármenetek; elhajlás,diffrakció, interferencia, aberrációk, asztigmatizmus).A fénymikroszkóp felépítése, részei (megvilágító egység, kondenzor-rendszer, objektív-okulár lencsék), képalkotása.Optikai sugármenetek. Feloldóképesség. A kép rögzítése (fotó-, video-, digitális fotó-kamera, CCD kamera). Mikromorfometria.Stereo-mikroszkópia.2. Előadás (2 óra): Mintakészítés I. A biológiai minták (elemi) felépítése, szerkezete, tulajdonságai a mikroszkópos leképezésszempontjából. (Fény)-mikroszkópos preparátumok készítésének általános elvei, követelményei. Natív vizsgálatok.Vitális festékek.Post mortem fény- és elektronmikroszkópos minták készítésének általános lépései:Fixálás: fizikai és kémiai fixáló módszerek. Immerziós, perfúziós fixálás. Fagyasztási technikák (freeze -fracturing, -etching, -drying,). Pufferek. Ozmózis-nyomás.3. Előadás (2 óra): Mintakészítés II. „Víztelenítés” (folyadékcsere) kémiai és fizikai módszerekkel. Kritikus ponton szárításelve és gyakorlata.Beágyazás (paraffin, észterviasz, zselatin; -műgyantákba: akril-, epoxi-, poliésztergyanta). Vizet tűrő és nem tűrő beágyazóanyagok tulajdonságai.Metszetek (vastag, félvékony, ultravékony) készítése mikrotómmal. Szánkamikrotóm. Fagyasztómikrotóm.Ultramikrotóm.A metszetek festése, „kontrasztosítása”. Fény- és elektronmikroszkópos metszetek kezelése festés előtt/után. Fény- éselektronmikroszkópos festékek (színezékek) és anyagok.4. Előadás (2 óra): Speciális (fény)-mikroszkópok: Fáziskontraszt mikroszkóp. Polarizációs mikroszkóp. A fénypolarizáció,síkban és cirkulárisan poláros fény. Kettőstörés. Differenciális interferencia-kontraszt mikroszkópia (DIC). Fluoreszcensmikroszkópia. Immuno-fluoreszcenciás vizsgálatok.Pásztázó mikroszkópos módszerek: A pásztázás elve/mechanizmusa. Piezoelektromos jelenség. Atomerő mikroszkópia(AFM). Közeli mező optikai mikroszkópia (NSOM).Konfokális lézer pásztázó mikroszkópia (CLSM).5. Előadás (2 óra): Transzmissziós elektronmikroszkóp (T-EM) felépítése, működési elve, egységei: elektronforrás, kondenzor„lencse” rendszer, objektív-, projektor „lencsék”. Vákuumrendszer. Vezérlő elektronika ill. számítógép. Elektronmintakölcsönhatás természete és fajtái. Az EM-kép keletkezése, jellemzői, információ-tartalma (amplitúdó- és fáziskontraszt).A mintatartók és fajtái. A vizsgálat menete. Felületi lenyomat (replika-, komplementer replika) készítése. A képrögzítése (video, fotonegatív, image plate, CCD kamera, stb.). Pozitív (fény)-kép készítése.6. Előadás (2 óra): Pásztázó- (SEM), környezeti (nyomású) pásztázó- (ESEM), pásztázó transzmissziós elektronmikroszkóp(STEM) felépítése, és működésük alapelve, képalkotásuk. A minta készítésének szempontjai és eljárásai SEM,ESEM, ill. STEM üzemmódú vizsgálat esetében. Gyors-fagyasztással (vitrifikált jég) készült minta. Felületi lenyomat (replika-,komplementer replika) készítése. Fagyasztva szárítás. A minták vezetőképességének és e - kibocsátásának növelése:kémiai eljárással, vákuumgőzöléssel, sputterrel, stb.7. Előadás (2 óra): Speciális elektronmikroszkópos vizsgálati módszerek. Nagyfeszültségű EM (HVEM). Egész-sejt preparátumkészítése, előnyei. Periódikus struktúrák (kristályok) elektron-diffrakciós vizsgálata (SAD, MAD). Augerelektronok(felszínhez közeli kémiai kötések) spektroszkópiája. EM-autoradiográfia. Biológiai molekulák szubmolekulárisszerkezetének vizsgálata elektronkrisztallográfiás módszerrel.8. Előadás (2 óra): Analitikai elektronmikroszkópia: Elektronmikroszkópos Röntgen-mikroanalízis (EDAX, WDX). Aröntgen-sugárzás jellemzői, keletkezése az EM-ban. A minta elemi analízise. Morfológia + elemi eloszlás.Elektron energia veszteségen (alapuló) spektroszkópia (EELS). A minták előkészítése (diffuzibilis elemek) elemi analízisére.Gyors-fagyasztás, fagyasztva- szárítás.254

A tantárgy/kurzus címe: A tantárgy/kurzus száma: Félév:Mikroszkópos technikák5. félévA kurzus típusa: gyakorlat Óraszám/hét: 16 Kreditek száma: 1Előadótanár: Dr.Varga Sándor, egyetemi tanárIntézet/Tanszék:DE-OEC, Klinikai Kutató Központ, Elektronmikroszkópos Laboratórium4012 Debrecen, Nagyerdei krt. 98. Tel.: (52) 431-956, Fax: (52) 340-011A kurzus státusa a tanulmányi programon belül:kötelező modulA kurzus célja:Megismertetni a hallgatókkal a legmodernebb mikroszkópos technikákat, amelyeket a klinikai diagnosztikában,ill. a kutatói munkában előforduló ultrastruktúrális vizsgálatok során alkalmazhatnak. Célaz elméleti előadások során megismert eszközök (fény- ill. elektronmikroszkópok) kezelésében, ill. aminták készítésében való jártaság megszerzése.A kurzus leírása:Az előadásokon ismertetett fény- (pl.: fluoreszcenciás, konfokális-, AFM) és elektronmikroszkópok(TEM, SEM, EDAX) gyakorlati használata, ill. a különböző mikroszkópos technikákhoz szükségesminták gyakorlati elkésztése (grídek preparálása, fixálás, vákuum-gőzölés, mikroszkópozás, stb.)Követelmények:A megismert eszközök önálló használatában, ill. a mintakészítésben való jártasság bizonyítása.Oktatási módszer:A gyakorlatok során a konkrét mikroszkóp-fajta mellett mutatjuk be annak tulajdonságait, működését,ill. a technikánál alkalmazott minta elkészítésének lépéseit. A hallgató tevőlegesen részt vesz a mikroszkópkezelésében, ill. a minta elkészítésében.Előfeltételek:Az elméleti előadásokon való részvétel.Oktatási segédeszközök:-Molnár László-Gábriel Róbert: Fény- és elektronmikroszkópos mikrotechnika. Dialóg Campus Kiadó.Budapest - Pécs, 2001-Bozzola, J.J., Russell, L.D.: Electron microscopy. Principles and techniques for Biologists. Jones andBartlett Publ., Boston, 1992.; -Sillabusz az aznapi előadás/gyakorlat anyagáról (Dr.Varga Sándor)Vizsgáztatási módszerek:Az elméleti anyagból írott teszt, ill. a gyakorlati „vizsgán” mutatott jártasság alapján tett kollokviumijegymegajánlással. Jobb jegyért a hallgató szóbeli vizsgáztatásával kiegészítve.Értékelés:A különböző technikák alapjai (elvi alapok, működési elvek) ismeretének, ill. a műszer gyakorlatihasználatában való jártasság felmérésével. (A gyakorlati jártasságot konkrét mikroszkópos gyakorlatsorán értékelve).1.gyakorlat (4 óra): Ismerkedés a vékonymetszet készítés lépéseivel: befaragás, késkészítés, stb., a mikrotóm kezelése.Fény- és elektronmikroszkópos vizsgálatra alkalmas vastag, félvékony, ultravékony metszetek készítése mikrotómmal,ultramikrotómmal. Festés, kontrasztozás. Fénymikroszkóp használata, digitális (fénykép)felvételek készítése különbözőüzemmódú mikroszkópon.2.gyakorlat (4 óra): Hordozóhártya készítés grídre különböző hártyaképző anyagokból, ill. vákuumgőzölt szénréteggel.Vizsgálat transzmissziós elektronmikroszkópban. Döntött minta felvételek. Kontraszt-változtatás gyorsítófeszültségváltoztatással,blendékkel. Felvételek készítése. Negatívok előhívása (fotólabor). Pozitív képek készítése.3.gyakorlat (4 óra): Mintakészítés felület-vizsgálati üzemmódú SEM mikroszkópra. A minta orientált felülettel történőrögzítése („vezető-ragasztóval”) a mintahordó-tömbre stereo-mikroszkóp alatt. Vezetőképesség növelése arannyal történővákuum-gőzölt bevonattal. Felület-vizsgálat. Felvételek készítése.4.gyakorlat (4 óra): Minták készítése elektronmikroszkópos Röntgen mikroanalízis morfológiai/elemi vizsgálatra. AzEDAX rendszer alkalmazása. Ismeretlen minta elemi összetételének vizsgálata. Elemek azonosítása az energia- spektrumadatai alapján. A morfológiai és analitikai adatok egyeztetése.255

„Mikroszkópos technikák”1. Előadás (2 óra): A leképezéshez/képalkotáshoz alkalmazott sugárzások: elektromágneses sugárzások (látható fény,Röntgen-, gamma-sugárzás, UV-sugárzás, stb.); elektronsugárzás; lézer; Röntgen-fluoreszcencia. A fény kettős (részecske,hullám) természetéről.Az optikai képalkotás eszközei, törvényszerűségei és hibái (optikai törőközeg: lencse, törésmutató, sugármenetek; elhajlás,diffrakció, interferencia, aberrációk, asztigmatizmus).A fénymikroszkóp felépítése, részei (megvilágító egység, kondenzor-rendszer, objektív-okulár lencsék), képalkotása.Optikai sugármenetek. Feloldóképesség. A kép rögzítése (fotó-, video-, digitális fotó-kamera, CCD kamera). Mikromorfometria.Stereo-mikroszkópia.2. Előadás (2 óra): Mintakészítés I. A biológiai minták (elemi) felépítése, szerkezete, tulajdonságai a mikroszkópos leképezésszempontjából. (Fény)-mikroszkópos preparátumok készítésének általános elvei, követelményei. Natív vizsgálatok.Vitális festékek.Post mortem fény- és elektronmikroszkópos minták készítésének általános lépései:Fixálás: fizikai és kémiai fixáló módszerek. Immerziós, perfúziós fixálás. Fagyasztási technikák (freeze -fracturing, -etching, -drying,). Pufferek. Ozmózis-nyomás.3. Előadás (2 óra): Mintakészítés II. „Víztelenítés” (folyadékcsere) kémiai és fizikai módszerekkel. Kritikus ponton szárításelve és gyakorlata.Beágyazás (paraffin, észterviasz, zselatin; -műgyantákba: akril-, epoxi-, poliésztergyanta). Vizet tűrő és nem tűrő beágyazóanyagok tulajdonságai.Metszetek (vastag, félvékony, ultravékony) készítése mikrotómmal. Szánkamikrotóm. Fagyasztómikrotóm.Ultramikrotóm.A metszetek festése, „kontrasztosítása”. Fény- és elektronmikroszkópos metszetek kezelése festés előtt/után. Fény- éselektronmikroszkópos festékek (színezékek) és anyagok.4. Előadás (2 óra): Speciális (fény)-mikroszkópok: Fáziskontraszt mikroszkóp. Polarizációs mikroszkóp. A fénypolarizáció,síkban és cirkulárisan poláros fény. Kettőstörés. Differenciális interferencia-kontraszt mikroszkópia (DIC). Fluoreszcensmikroszkópia. Immuno-fluoreszcenciás vizsgálatok.Pásztázó mikroszkópos módszerek: A pásztázás elve/mechanizmusa. Piezoelektromos jelenség. Atomerő mikroszkópia(AFM). Közeli mező optikai mikroszkópia (NSOM).Konfokális lézer pásztázó mikroszkópia (CLSM).5. Előadás (2 óra): Transzmissziós elektronmikroszkóp (T-EM) felépítése, működési elve, egységei: elektronforrás, kondenzor„lencse” rendszer, objektív-, projektor „lencsék”. Vákuumrendszer. Vezérlő elektronika ill. számítógép. Elektronmintakölcsönhatás természete és fajtái. Az EM-kép keletkezése, jellemzői, információ-tartalma (amplitúdó- és fáziskontraszt).A mintatartók és fajtái. A vizsgálat menete. Felületi lenyomat (replika-, komplementer replika) készítése. A képrögzítése (video, fotonegatív, image plate, CCD kamera, stb.). Pozitív (fény)-kép készítése.6. Előadás (2 óra): Pásztázó- (SEM), környezeti (nyomású) pásztázó- (ESEM), pásztázó transzmissziós elektronmikroszkóp(STEM) felépítése, és működésük alapelve, képalkotásuk. A minta készítésének szempontjai és eljárásai SEM,ESEM, ill. STEM üzemmódú vizsgálat esetében. Gyors-fagyasztással (vitrifikált jég) készült minta. Felületi lenyomat (replika-,komplementer replika) készítése. Fagyasztva szárítás. A minták vezetőképességének és e - kibocsátásának növelése:kémiai eljárással, vákuumgőzöléssel, sputterrel, stb.7. Előadás (2 óra): Speciális elektronmikroszkópos vizsgálati módszerek. Nagyfeszültségű EM (HVEM). Egész-sejt preparátumkészítése, előnyei. Periódikus struktúrák (kristályok) elektron-diffrakciós vizsgálata (SAD, MAD). Augerelektronok(felszínhez közeli kémiai kötések) spektroszkópiája. EM-autoradiográfia. Biológiai molekulák szubmolekulárisszerkezetének vizsgálata elektronkrisztallográfiás módszerrel.8. Előadás (2 óra): Analitikai elektronmikroszkópia: Elektronmikroszkópos Röntgen-mikroanalízis (EDAX, WDX). Aröntgen-sugárzás jellemzői, keletkezése az EM-ban. A minta elemi analízise. Morfológia + elemi eloszlás.Elektron energia veszteségen (alapuló) spektroszkópia (EELS). A minták előkészítése (diffuzibilis elemek) elemi analízisére.Gyors-fagyasztás, fagyasztva- szárítás.254

logo

products

Resources

Company

Terms of service
Privacy policy
Cookie policy
Cookie settings
Imprint
Change language
Made with love in Switzerland
© 2024 Yumpu.com all rights reserved

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!