Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

B2.3. Forgács Attila TTK V.Biofizikai és Sejtbiológiai IntézetPOLARIZÁCIÓS FLUORESZCENCIA REZONANCIA ENERGIATRANSZFER MÓDSZER A SEJTFELSZÍNI ANTIGÉNEK LATERÁLIS ÉSROTÁCIÓS MOBILITÁSÁNAK SZIMULTÁN DETEKTÁLÁSÁRAEgy olyan mérési eljárást szeretnék bemutatni, amellyel képesek vagyunkszimultán detektálni sejtfelszíni receptorok transzlációját és rotációját, ezzellehetvé téve a merev testnek tekintett rendszer elmozdulásának általánosleírását. Tehetjük ezt úgy, hogy a donor- és akceptor párként mködfluoreszkáló molekulák gerjesztése után a fluoreszcencia intenzitásokat –ellentétben a napjainkban elterjedt metódusával - polarizáltan detektáljuk.Polarizált komponensekkel számolva -szemben a ma alkalmazott két gerjesztsugaras eljárással- itt egy lézer is elegend az általános energiatranszferprobléma megoldásához. További méréstechnikai sajátosság, hogy így a fénytranszverzális hullám természetébl adódó detektálási hiba is kiküszöbölhet.Számolhatunk anizotrópiákat, amelyek segítségével az akceptor és donorrotációját vizsgálhatjuk. Tehát párosítva az energiatranszfer mérést azanizotrópiaméréssel, sejtfelszíni receptorok konformációs fluktuációját tudjuknagy érzékenységgel detektálni. Szintén meghatározható a donor és az akceptormennyisége, továbbá ebben a mérési elrendezésben lehetvé válik azorientációs faktor (kappa-négyzet) meghatározása sejtfelszínen, energiatranszfermellett, és így nem kell a kappa-négyzet 2/3-os közelítésére hivatkozni, ami azenergiatranszfer hatásfokból számolt donor-akceptor távolságok értékét hibávalterheli. A donor-akceptor asszociációs hányad ismeretében a donor forgásiparaméterei ugyancsak meghatározhatók, úgy, mint forgási korrelációs id,kezdeti határanizotrópia.Munkám során MHCI és MHCII sejtfelszíni molekulák receptorainakkonformáció változását vizsgáltam, homo- (MHCI-MHCI) és hetero- (MHCI-MHCII) asszociációk esetén, különböz receptorokat használva donorként ésakceptorként, különböz típusú immunsejteken. Ezen receptor párok egymáshozviszonyított elmozdulását a sejtméret folyamatos növelése eredményezte, ahol asejtméretet ozmózisnyomás segítségével állítottam be.Azon túl, hogy méréseim igazolják magának a mérési módszernek alétjogosultságát és használhatóságát, a rendszeren történ els mérések újinformációkat is közölnek a sejtfelszíni receptorok dinamikájáról.Témavezet: Dr. Bene László, Prof. Dr. Mátyus László81