Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

B2.7. Erds Ádám Mol.Biol. V.Klinikai Kutató KözpontA FIBRINOGÉNHEZ KÖTD PEPTIDEKÉrsérülés után, szerin proteázok aktivációs kaszkádja az oldható fibrinogén,fibrinné való átalakulásához vezet. A polimerizáció els lépésekéntprotofibrillumok keletkeznek a fibrin molekulákból. A polimerizációs reakcióreverzibilis, egészen addig, amíg a XIIIa faktor kovalens keresztkötéseket nemhoz létre a fibrin láncok között.Munkám célja az volt, hogy olyan aminosav szekvenciát/kat határozzunk meg,amelyekkel a fibrinogén ligandja/i legnagyobb valószínséggel kötdnek egyimmobilizált fibrinogén matrixhoz. Ehhez egy lineáris (L12) „phage display”könyvtárat használtunk, a fágokat polisztirol lemzen immobilizált fibrinogénfelszínen szelektáltuk. Három szelekciós kört végeztünk, mindhárom körbennem specifikus (savi) elúcióval távolítottuk el a kötdött fágokat. Az egyesfágkörök során bevitt- és a fágkörök eredményeként kapott fágok specifitásátELISA módszerrel ellenriztük. A módszer lényege az, hogy a fibrinogénhezkötd fágokhoz tormaperoxidázzal konjugált antitestet (HRPO/Anti-M13monoclonal conjugate) adtunk, majd OPD szubsztrátmolekulát, melynekszínváltozása arányos a fibrinogénhez kötd fág mennyiségével. Afágszuszpenzióból DNS-t tisztítottunk, majd az egyszálú DNS bázissorrendjétciklusos szekvenálás segítségével meghatároztuk, amelybl a lehetséges peptidszekvenciát megállapítottuk. Hasonlóan a korábbi, 15-ös és 7-es könyvtárakkalvégzett szelekcióinkhoz, ismét Gly-Pro-Arg-Pro szekvencia választódott ki afibrinogén felszínen, amelyekben nemcsak a fágpeptid aminósav száma, de aszelekció körülményei is különbözek voltak.Fágszelekciós kísérleteinkbl arra következtethetünk, hogy a fibrinogén GPRPköthelye, amely jól ismert, hogy a gamma láncon van, egy univerzálisköthely lehet és GPRP szekvenciát megfelel pozicióban tartalmazómolekulák elektrosztatikus erk hatására kapcsolódnak ehhez a köthelyhez.Témavezet: Dr. Hársfalvi Jolán77