Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

B2.6. Boratkó Anita Mol.Biol. V.Orvosi Vegytani IntézetPROTEIN FOSZFATÁZ 2A ALEGYSÉGEK ÉS AZ ENDOTHELCITOSZKELETON SZERKEZETÉNEK KAPCSOLATAA citoszkeletális és intracelluláris fehérjék foszforilációs állapota befolyásolja acitoszkeleton elemeinek szervezdését, ezáltal az erek bels falát boritóendothel sejtek kontrakciós állapotát és az endothel barrier funkciót. Korábbankimutattuk, hogy a protein foszfatáz 2A (PP2A) részt vesz a barrier funkciószabályozásában és a citoszkeleton rendezdésében. Az enzim vázát egy 36kDa-os katalitikus (PP2Ac) és egy 65 kDa tömeg regulátor alegység (PP2Aa)alkotja. A PP2Ac és a PP2Aa alegységeket emls expressziós vektorokbaklónoztuk, a konstruktokkal humán tüd artéria endothel sejtekettranszfektáltunk és overexpresszáltuk a fehérjéket. A PP2Aa és PP2Acoverexpressziója és a két alegység koexpressziója az aktin filamentumokújrarendezdését eredményezte. Jelentsen csökkentette a trombin vagynokodazol által kiváltott F-aktin stresszkábelek kialakulását és a mikrotubulusdepolimerizációt.A PP2A dimerhez egy B alegység is kapcsolódik, melynek több formájátismerjük. A B alegységek a holoenzimek szubsztrátspecificitását és a sejtenbelüli lokalizációját határozzák meg. Jelenlegi munkánkban a PP2Ab ésPP2Ab’, PP2Ac, PP2Aa illetve HSP27 konstruktokkal transzfektáltunk marhatüd artéria endothel sejteket és a fehérjék overexpressziójátimmunfluoreszcenciával, illetve Western blottal vizsgáltuk. Az overexpresszáltHSP27 a citoplazmában jelenik meg, míg a rekombináns PP2A alegységektöbbnyire a sejtmagban lokalizálódnak; továbbá a PP2Ab’ overexpressziója asejtek morfológiai változását okozza. A HSP27 és a PP2Ac ko-expressziójasorán a két fehérje ko-lokalizációja figyelhet meg a sejtmagban, amely trombinkezelés hatására csökken: a HSP27 a citoplazmában is megjelenik. Pull downkísérleteinkben kimutattuk, hogy a PP2Ac alegység kötdik a PP2Aaalegységhez és Hsp27-hez.A PP2Ab szerepének tanulmányozását a továbbiakban az endogén fehérjeimmunfestésével illetve siRNS technikával depletált sejtekben folytatjuk.Vizsgálataink a tüd artéria endothelium barrier funkció szabályozásának jobbmegértését segítik el.Témavezet: Dr. Csortos Csilla59