12.07.2015 Views

Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

SHOW MORE
SHOW LESS

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.

MB2.5. Takács Roland Mol.Biol. V.Anatómia, Szövet- és Fejldéstani IntézetA PURINERG RECEPTOROK EXPRESSZIÓJÁNAK ÉS APORCDIFFERENCIÁCIÓ CA-HOMEOSZTÁZISÁNAKÖSSZEHASONLÍTÓ VIZSGÁLATA HIGH <strong>DE</strong>NSITY CSIRKE ÉS EGÉR(C3H10T) SEJTKULTÚRÁKBANA csirkeembriók végtagtelepeibl szeparált mezenchimális porcosodó sejteknagy srségben tenyésztve porcszövetet hoznak létre. A differenciálódáskapcsán a sejtek Ca-homeosztázisát, és az ennek kapcsán kiemelkedfontosságúnak bizonyuló purinerg ionotrop (P2X-) csatornák expressziósmintázatát laboratóriumunk eredményei alapján ismerjük. Jelen kísérleteinksorán e modell emls megfeleljének, a C3H10T sejtvonal (egér embrionálismezenchimális sejtek) sejtjeibl létrehozott high density kultúrákat használtuk.A nagy srségben (15 millió sejt/ml) kicseppentett sejtekhez BMP-4-et (BoneMorphogenic Protein 4) adva, a 6 napos tenyésztési periódus végére porcmatrixképzdésreutaló metakromáziás festdést tapasztaltunk savasdimetilmetilénkékkel történ festést követen. Az intracelluláriskalciumkoncentráció változásait Fura-2, Ca-érzékeny fluoreszcenciás festékabszorpciós spektrumváltozásainak detektálásával követjük nyomon. A csirkeporcosodó kultúrák esetében a differenciálódás 3. napjára esik egy szignifikánsCa-koncentrációcsúcs, amely vizsgálataink szerint elssorban Ca-influxeredménye. Ugyanekkor a csirke kondroprogenitor sejtek extracellulárisanadagolt ATP-re erteljes Ca-tranziensekkel válaszolnak. A C3H10T sejtekbldifferenciáltatott porcosodó sejtekbl elállított high density kultúrák sejtjeibeneddig nem tudtunk a BMP-adását követ 3. tenyésztési napon ATP-dependensCa-tranzienseket detektálni. A purinerg receptorok mRNS-ének kimutatásához aprimereket Primer Premier 5.0 program segítségével terveztük. RT-PCRreakciókkal mindkét sejttípus esetében sikerült kimutatnunk többféle P2X- ésP2Y-purinoreceptor mRNS-ét, ám a két modellben eltér expressziós mintázatotkaptunk. A csirke sejteken a legtöbb receptor fehérjeszinten való jelenlétét isbebizonyítottuk már. Vizsgálataink alapján elssorban az ionotrop P2X4receptor tnik szabályozó szerepnek a csirke kondroprogenitor sejtekdifferenciálódása során. További kísérleteink során szeretnénk tisztázni a kétféleporcdifferenciációs modell kalciumhomeosztázisának eltéréseit.Témavezet: Dr. Zákány Róza, Matta Csaba207

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!