Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

MB2.7. Nagy Zsuzsanna Mol.Biol. V.Élettani IntézetA TASK-3 FEHÉRJE SZINTÉZISÉNEK PERMANENS GÁTLÁSA, ÉSANNAK HATÁSA A MELANOMA MALIGNUM SEJTEK TÚLÉLÉSÉREÉS MORFOLÓGIAI JELLEMZIREA TASK-3-csatornák potenciális onkogén hatású molekulák; már többrosszindulatú daganattípusban leírták a fehérje génjének (kcnk9) amplifikációjátés a fehérjetermék overexpresszióját. Korábbi kísérleteink soránmegállapítottuk, hogy a melanoma malignum sejtek ers TASK-3-specifikusjelöldést mutatnak.Jelen munkában létrehoztunk egy olyan melanoma malignum sejttenyészetet,amelyben a TASK-3 csatornafehérje kifejezdését egy TASK-3-specifikusshRNS kazettát expresszáló, szelekciós markereket tartalmazó vektorsegítségével stabilan meggátoltuk. A kísérletek során egy korábbi munkánksorán megtervezett TASK-3-specifikus shRNS kazettát, valamint egy negatívkontrollként alkalmazott „scrambled” shRNS szekvenciát építettünk be apRNAT-U6.1/Neo cGFP shRNS expressziós vektorba. Az elkészítettplazmidkonstrukciót kompetens E. coli baktérium törzsben felszaporítottuk,majd plazmidpreparálási eljárás útján azt tiszta formában kinyertük abaktériumsejtekbl. Az expressziós vektorral tenyészetben fenntartottmelanoma sejteket transzfektáltunk. Mivel a pRNAT-U6.1/Neo vektorexpresszál egy zöld fluoreszcens fehérjét (GFP), a sikeresen transzfektáltsejtekben a vektor kifejezdése egyértelmen megítélhet volt. A fenntartotttenyészeteken geneticin-rezisztencián alapuló szelekciót végeztünk, aminekkövetkeztében a csak azok a sejtek maradhattak életben, amelyek a vektortvalóban felvették és expresszálják. A TASK-3-géncsendesített melanomasejttenyészeten és a megfelel kontroll tenyészeteken ezután immuncitokémiaalkalmazásával vizsgáltuk a sejtek morfológiájában bekövetkezett változást, ésigazoltuk a TASK-3 csatornafehérje expressziójának gátlását.Eredményeink szerint a TASK-3 csatornát nem expresszáló melanoma sejtek akontroll sejttenyészethez képest jellegzetes morfológiai változásokon mentekkeresztül, azokban feltnen csökkent a nyúlványok száma és hossza. A vektortexpresszáló tenyészetben a sejtszaporodás üteme is jelents csökkenéstmutatott. Eredményeinkbl arra következtethetünk, hogy a TASK-3-csatornákmeghatározó jelentségek a melanoma sejtek életképességének ésproliferációjának biztosításában.Témavezet: Kosztka Lívia, Dr. Rusznák Zoltán161