Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

MB1.4. Nagy Gergely TTK V.Biokémiai és Molekuláris Biológiai IntézetA RETINSAV RECEPTOR (RAR) ÉS D-VITAMIN RECEPTOR (VDR)ÁLTALI KÖZÖS TRANSZKRIPCIÓS SZABÁLYOZÁS MOLEKULÁRISHÁTTERÉNEK VIZSGÁLATA COS1 SEJTVONALBANA gének szabályozó szakaszain általában több transzkripciós faktor válaszadóeleme („response element”, RE) is megtalálható, ami lehetvé teszi aszabályozás változatosságát. A magreceptorok olyan transzkripciós faktorok,melyek lipofil vegyületeket kötve változtatják meg a gének transzkripciósaktivitását. Ilyen lipofil vegyületek a retinsavak és az aktív D-vitamin. Ezekreceptorai a RAR és VDR, melyek specifikus RE-hez képesek kötdni. Mindkétreceptor retinoid X receptorral (RXR-rel) alkot heterodimert. A VDR-RXR ésRAR-RXR dimerek általában az AGGTCA szekvencia „direct repeat”-jéhez, 2,3 vagy 5 nukleotiddal elválasztott hexamerekhez kapcsolódnak (DR-2, DR-3 ésDR-5 szerkezet RE-k).Korábbi kísérleteink során humán monocita eredet éretlen dendritikussejtekben microarray technika segítségével azonosítottuk az aktív D-vitamin ésAM580 (RAR-alfa ligand) által szabályozott géneket. Eredményeink szerint akét receptor jelents számú közös célgénnel rendelkezik, a D-vitamin általszabályozott gének 25%-át az AM580 ligand is szabályozza. Ennek amegfigyelésnek több molekuláris magyarázata lehet. Elssorban a koránszabályozott gének esetében valószínsíthet, hogy egy részük direkt célgénjemindkét receptornak, és a VDR és RAR ugyanazt az RE-t használja aszabályozáshoz. Ennek ellenére a közös célgének túlnyomó többségénél csak azegyik receptor közvetlen szabályozását írták le (pl. a fibronektin VDR RE, míga trombomodulin RAR RE által szabályozott).Kísérleteink során tranziens transzfekcióval, COS1 sejtvonalban vizsgáltuk,hogy az irodalomból ismert klasszikus DR-3 (VDR által felismert) RE-t vajonképes-e a RAR is felismerni és azon keresztül szabályozni, és fordítva. Ehhezhumán magreceptorokat kifejez és riporter (RE-luciferázt tartalmazó)plazmidokat vittünk a sejtekbe, majd ligandkezelés után mértük a luciferáz jelet.A VDR és RAR-alfa mellett RXR-alfát, és RE-ként klasszikus DR-3-at és DR-5-öt, valamint a különböz célgének már azonosított válaszadó elemeithasználtuk. Eddigi eredményeink azt mutatják, hogy a receptorok képesektöbbfajta válaszadó elem felismerésére is, amin keresztül megvalósul apromoter-aktivitás fokozása.Témavezet: Prof.Dr. Nagy László, Széles Lajos158