Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

B2.1. Nagy Edit ÁOK V.Biokémiai és Molekuláris Biológiai IntézetHUMÁN PROMYELOCITÁS LEUKAEMIA SEJTVONALBÓL (NB4)KIINDULÓ ÉRETLEN DENDRITIKUS SEJT (IDC) MODELLLÉTREHOZÁSAA dendritikus sejtek (DC-k) az immunrendszer rszemeiként antigéneketvesznek fel, melynek hatására T-sejtek stimulálására képes antigénprezentálósejtekké érnek.A DC-k komplex funkcióinak vizsgálatára három megközelítéssel lehet sejteketnyerni. Az iDC-k perifériás vérbl ex vivo csak kis mennyiségben izolálhatók.Az in vitro módszer során perifériás vérbl izolált monociták interleukin-4 (IL-4) és granulocita-makrofág kolónia stimuláló faktor (GM-CSF) kezelésévelállítanak el iDC-ket. A harmadik alternatíva olyan modell megalkotása, melyvérbl történ izolálás nélkül gyakorlatilag korlátlan iDC forrást biztosít éretlensejtekbl való differenciáltatással.Vizsgálataink célja olyan kezelési protokoll kidolgozása, melynek révén NB4promyelocitás sejtvonalból iDC-k differenciációja érhet el.Az NB4 sejtek differenciációját 10 napos szekvenciális kezelési protokollalindukáltuk. Elször all-transz retinsav (1.nap), majd phorbol-myristát-acetát ésD-vitamin (2.nap) kezelést alkalmaztunk. Az így keletkez monocitoid sejteketaz 5. és 8. napon alkalmazott IL-4 és GM-CSF kezeléssel juttatuk el iDC-nekmegfelel stádiumig. A differenciáció három különböz fázisábanlipopoliszacharid (LPS) stimulációval indukáltuk a sejtek érését. A folyamatotmonocitára (CD11b, CD11c, CD14, CD40, CD86, CD206) és DC-re (CD1a,CD11c, CD83, CD86, CD206, CD209) jellemz sejtfelszíni markerek áramlásicitometriás mérésével monitoroztuk. A sejtek fagocitáló képességét bead assayvelteszteltük.A sejtek differenciációjának elrehaladásával folyamatos szintnövekedéstmértünk a CD11b, CD11c és CD86 markerek esetében. A CD14 expressziója amonocita-preDC állapotig emelkedett, majd alacsonyabb értéket ért el az iDC-n,ahol CD209-et is detektáltuk 10% feletti fagocitáló aktivitással. LPS hatásáraemelkedett kostimulátor szintet és csökkent fagocitáló kapacitást mértünk.A differenciációs folyamat végén olyan tipikus DC-re jellemz nyúlványosmorfológiájú, DC markereket kifejez, funkcionálisan aktív sejtet kaptunk, amiújabb modellként szolgálhat a DC-k immunbiológiájának pontosabbmegismeréséhez és utat nyithat az olyan klinikai relevanciájú fejlesztések felémint a tumor elleni DC-vakcináció.Témavezet: Dr. Májai Gyöngyike156