Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

E2.6. Nagy Attila ÁOK IV.Klinikai Kutató KözpontAKTIVÁLT FAKTOR X-ANTITHROMBIN III KOMPLEX MÉRÉSÉRESZOLGÁLÓ IMMUNOASSAY KIDOLGOZÁSABevezetés: Jelenleg nem rendelkezünk igazán jó laboratóriumi teszttel athrombosisok, thromboembóliák, ill. az ezt megelz prethrombotikus állapotokdiagnosztikájában. E tesztekkel szemben alapvet követelmény a gyorsaság, amegfelel szenzitivitás és specificitás. A klinikai diagnosztikában elssorban aD-dimer tesztet alkalmazzák, mely magas negatív prediktív értéke révénelssorban kizárásra alkalmazható. A thrombin-antithrombin III (TAT) komplexmérésére alkalmas enzyme-linked immunoassay (ELISA) is használható, dedrága, idigényes vizsgálat, emiatt a rutin diagnosztikában használata nemterjedt el.Célkitzés: Szendvics immunoassay kidolgozása az aktív FX-antithrombin III(FXa-AT) komplex kimutatására, mely a TAT komplexhez képest a véralvadásaktivációját annak korábbi fázisában jelzi. További célunk a TAT komplexELISA és az FXa-ATIII komplex ELISA diagnosztikai hatékonyságánakmeghatározása és az eredmények D-dimer teszttel nyert eredményekkel történösszevetése klinikai beteganyagon.Eredmények: 16 betegben határoztuk meg a TAT komplex és a D-dimerértékeket. A TAT komplex mérés reprodukálhatósága a mérés alacsony (2.1859mikrog/L) tartományában 18.8%, míg a magas (11.862 mikrog/L) tartományban6.35%-nak adódott. A TAT komplex és a D-dimer módszerek között gyengekorreláció (R²=0.37) volt megfigyelhet. Az FXa-AT komplex mérésérealkalmas ELISA kidolgozásához poliklonális, biotinált humán-FX ellenesantitestet használtunk elfogó antitestként, jelöl antitestként birkábantermeltetett, peroxidázzal jelölt anti-humán antithrombin III antitestetalkalmaztunk. A peroxidáz aktivitást kromogén szubsztráttal mértük. Ateszteléshez különböz koncentrációjú (12.5-400 pM) FXa-AT komplexethasználtunk, FX hiányplazmában hígítva. A módszer linearitása (R²=0.99)megfelel volt, azonban érzékenyítésre volt szükség. A továbbfejlesztetttesztben kemilumineszcens szubsztrátot használtunk, mellyel az érzékenységjelentsen ntt.Konklúzió: Az általunk kidolgozott gyors, egylépéses ELISA alkalmas lehetFXa-AT komplex mérésére plazmában, így elsegítheti a thrombosisdiagnosztikát. Nagyobb létszámú klinikai beteganyagon a módszer kipróbálásafolyamatban van.Témavezet: Dr. Bagoly Zsuzsa154