Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

B2.5. Margitai Zoltán ÁOK II.Biofizikai és Sejtbiológia IntézetÁRAMLÁSI ÉS KÉPALKOTÓ CITOMÉTERES SEJTCIKLUS ANALÍZISÖSSZEHASONLÍTÁSA - TÜD TUMOR SEJTEKBEN, MIKRO-RNSKEZELÉS HATÁSÁRAA mikro-RNS-ek fontosak, a sejt fehérjekészletének és mködésénekszabályozásában. Ezek jellemzen, a hírviv-RNS-ek 3’-UTR-hezkapcsolódnak és a transzlációt gátolják. Kutatásunk során, mir-126 és 222prekurzor mikroRNS-t transzfektáltunk, kis sejtes, tüd tumor eredet, H69SCLC sejtvonalba és azok sejtciklusra kifejtett hatását vizsgáltuk áramlási(FACSarray) és képalkotó citométerrel (iCys).A sejtminta feldolgozásakor elször, annak minségén kellett javítani, mert ahagyományos, etanolos fixálással - idtartamától függetlenül - a sejtek ersenaggregálódtak, ezért kipróbáltunk formaldehides és metanolos fixálást is. Ezekközül az utóbbi bizonyult jobbnak, mind a DNS tartalom PI-os festdése, mindannak vizsgálata szempontjából, de így több sejtre volt szükségünk.Méréseinkben különböz stratégiákat alkalmaztunk, az aggregátumokkizárására az elemzésbl. Áramlási citometriánál, FSC-A SSC-A és FSC-WSSC-W, kétváltozós hisztogrammokon kapuzva minimalizáltuk azokmennyiségét. Képalkotó citometriával, a sejtek kerületének és cirkularitásánakértékére kapuzva, valamint egy kibvített sejtkontúr használatával kaptuk, alegmegfelelbb egyedi sejteket. Az analízist, áramlási citometriás adatokonModFit LT, míg képalkotó citometria esetén, a rendszer saját szoftverévelvégeztük.Mir-126 esetében, etanolos fixálás során kis mérték, de szignifikáns G1blokkot tapasztaltunk: G1 fázisban 6%-al több(P = 0.035), S-ben 5%-alkevesebb sejt volt, a kontrollhoz képest (P =