Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

MB1.7. Lázár Nóra Gabriella ÁOK VI.Klinikai Biokémiai és Molekuláris Patológiai IntézetMICROSATELLITA INSTABILITÁS VIZSGÁLATA SPORADIKUS ÉSFAMILIÁRIS VASTAGBÉL DAGANATOKBANA colorectalis carcinomás (CRC) betegek kb. 15-20%-ában familiaritásmutatható ki és a leggyakoribb örökletes forma a herediter nem-polyposuscolorectalis carcinoma (HNPCC). Ennek hátterében a DNS-replikáció hibáitkorrigáló hibajavító rendszer (MMR) fehérjéit kódoló gének genetikai eltéréseiállnak. A HNPCC diagnosztikájában szrmódszerként szolgál az MMRfehérjék immunhisztokémiai detektálása és a tumorból izolált DNS-en végzettmicrosatellita instabilitás (MSI) analízis. A genetikai eltérés definitívdiagnózisát az MMR fehérjék szekvencia analízise adhatja meg. Vizsgálatunkcélja az MSI felismerésére szolgáló, költséghatékony, rutin eljárás kidolgozásavolt. Munkánk során két mononukleotid és három dinukleotid microsatellitamarker amplifikálására szolgáló PCR-t optimalizáltunk, meghatározva az ideálisannealing hmérsékletet és primer koncentrációkat. A vizsgálandó minták egyrésze fagyasztott tumorból, míg másik része paraffinba ágyazott szövetblizolált DNS volt, ezért a PCR-eket mindkét templáthoz optimalizáltuk. Aköltséghatékonyság növelése érdekében az 5 egyedi PCR termékét poolozvaegyetlen kapilláris elektroforézis (ABI 310/3100) futtatással vizsgáltuk. Apoolozás arányainak és a kapilláris elektroforézis paramétereinek beállítása után84 HNPCC-re gyanús és 29 sporadikus CRC-ben szenved beteg tumormintáján teszteltük a módszert. A tumorokat magas fokú MSI (MSI-H),alacsony fokú MSI (MSI-L) és microsatellita stabil (MSS) csoportokraosztottuk. Az MSI-H gyakorisága a HNPCC-re gyanús betegekben 17,9% volt,míg a sporadikus esetekben nem találtunk MSI-H-t. MSI-L státuszú volt aHNPCC-re gyanús betegek 20,2%-a és a sporadikus tumorok 6,9%-a.Sporadikus CRC esetében a D17S250 és a BAT-25 microsatellita volt érintett,míg a HNPCC-s mintákban valamennyi marker instabilitása kimutatható volt,változó arányban. Az MSI-H státusz a HNPCC-s betegek esetében elvégzettimmunhisztokémiai vizsgálattal jó egyezést mutatott. A 15 MSI-H betegesetében elvégzett további genetikai vizsgálatok 11 betegnél (73,3%)azonosítottak patogén genetikai eltérést. Mindezek alapján a kidolgozott MSIvizsgálat a rutin klinikai analízis számára is jól használható módszernek tnik.Témavezet: Dr. Antal-Szalmás Péter140