Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

B1.7. Lajtos Tamás Mol.Biol. V.Biofizikai és Sejtbiológiai IntézetEGF RECEPTOR ÉS INTEGRIN BETA1 EXPRESSZIÓ SZEREPE GLIATUMOROK SUGÁRREZISZTENCIÁJÁBANAz epidermális növekedési faktor receptor (EGFR, ErbB1) a sejtekproliferációjában, differenciálódásában, migrációjában és túlélésében fontosszereppel bíró receptor tirozinkináz. Amplifikációja megfigyelhet a magas(IV.) grádusú glioblasztómák kialakulása során, és korrelációt mutatsugárrezisztenciájukkal, mellyel érdekes módon a 7. kromoszóma többlet iskorrelál - az EGFR génje pedig a 7p-n található. Méréseink szerint a mikrosejtfúzióval létrehozott, többlet 7. kromoszómát tartalmazó U251 glioblasztómasejtek a többlettel, és az általa megnövelt EGFR expresszióval arányossugárrezisztenciát mutatnak, és fokozott mértékben fejezik ki a beta1 integrintis, noha az nem ezen a lókuszon található. Jelen kísérleteinkben ezért aztvizsgáltuk, hogy az U251 sejtekbe önállóan bevitt EGFR gén milyen hatássalvan az integrin beta1 expresszióra, az EGFR-integrin kölcsönhatásra, és a sejteksugárérzékenységére.Az U251 NCI anyasejtvonalból elektroporációs transzfektálással, és többszöriáramlási citométeres dúsítással olyan sejtvonalakat hoztunk létre, melyek atöbblet EGFR-t magas (Hi) és alacsony (Lo) szinten expresszálják. Áramlásicitometriával vizsgáltuk az EGFR és beta1 integrin expresszió idbelialakulását, és megállapítottuk, hogy a Hi populáció a sejtválogatást követenegy passzálás után már kettéválik, és a Lo-nak megfelel expressziójúalpopuláció jelenik meg, melynek aránya folyamatosan n. A többlet EGFRugyanakkor többlet beta1 integrin kifejezdést okoz, mely idben stabil.Az új klónok az anyasejtvonalhoz képest az EGFR expresszió mértékévelarányos, fokozott kolóniaképz képességet, és megnövekedett sugárrezisztenciátmutattak. A széruméheztetés után EGF hatására létrejött, Western blottal mértAkt foszforiláció szintén az EGFR kifejezdés mértékével párhuzamosan ntt.Érdekes módon az áramlási citométeres FRET mérések arra utaltak, hogy azEGFR dimerizáció az expresszió növekedésével párhuzamosan csökken;ugyanakkor az EGFR-integrin kölcsönhatás fokozódik. Kétoldalú mikroszkóposFRET mérések igazolták, hogy beta1 integrin megjelenése az EGFRmolekulákat elvonja az EGFR dimerekbl, és az integrinnel valókölcsönhatásukra helyezi át a hangsúlyt, melynek következménye lehet aPI3K/Akt szignálút ersödése, a fokozott sejttúlélés, és sugárrezisztencia. Ezt ahipotézist munkacsoportunk klinikai glioblasztóma mintákon végzett méréseiigazolni látszanak.Témavezet: Dr. Vereb György136