Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

MB2.2. Kristóf Endre Károly ÁOK IV.Biokémiai és Molekuláris Biológiai IntézetA GLÜKOKORTIKOIDOK HUMÁN MAKROFÁGOK FAGOCITÓZISKÉPESSÉGÉT FOKOZÓ HATÁSÁNAK GÉNSZINT VIZSGÁLATANaponta kb. 500 milliárd fiziológiás módon elpusztult sejt komplikációmenteseltávolítását elssorban a mononukleáris fagocita rendszer végzi. Aglükokortikoidok anti-inflammatorikus és immunszupresszív hatása elssorbancitoplazmatikus receptorukon kifejtett transzkripciót szabályozó szerepükkelmagyarázható, de emellett különböz mechanizmusú nem genomikus rapidhatással is bírnak. Ismert, hogy jelents pozitív hatást fejtenek ki a makrofágokfagocitotikus kapacitására, azonban a fagocitózis-képességet befolyásolómolekuláris mechanizmus még nem tisztázott.Korábbi vizsgálataink alapján a glükokortikoid agonista dexametazon többapopto-fagocita gén expressziós szintjét megnövelte. Vizsgálataink célja annakbizonyítása volt, hogy a dexametazon az általunk vizsgált gének (ADORA3,AXL, C1QA, MERTK, THBS1) expressziójának növelésével hozzájárul afagocitózis képesség növekedéséhez.Humán vérbl izolált monociták három napig történ differenciáltatása után,elektroporáció révén siRNS-t juttattunk a sejtekbe. A knock-down hatást atranszkripció szintjén valós idej kvantitatív PCR-ral ellenriztük. Pozitívkontrollként lipofektamin kezelt, transzfektált HeLa sejteken is meghatároztuk alecsendesítés mértékét. Ezenkívül meghatároztuk a gének expressziós szintjénekváltozását THP sejteken dexametazon kezelés hatására, melyekben az nemfokozza a sejtek fagocitotikus kapacitását. A fagocitózis képesség méréséhezhumán vérbl szeparált apoptotikus netrofil granulocitákat alkalmaztunk. Afagocitózis assay-t a sejtek fluoreszcens festésével és a fagocitált sejthányadáramlási citometriával történ meghatározása alapján végeztük.Az öt vizsgált gén lecsendesítése során a knock-down hatás változó mértékbenfejezdött ki. A fagocitózis képesség az egyes gének lecsendesítésévelkismérték csökkenést mutatott, több gén együttes lecsendesítésével a hatásfokozható volt. A legkisebb knock-down hatás ellenére a legnagyobbfagocitózis csökkenést a dexametazon által felregulált tirozin kináz receptoroklecsendesítésével kaptuk. Ezen gének expressziója csökken dexametazonkezelés hatására THP sejteken, mely indirekt bizonyíték lehet ezen útvonalalapvet szerepére.Témavezet: Prof.Dr. Fésüs László, Dr. Zahuczky Gábor133