Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

B1.3. Kovács Tamás ÁOK V.Biofizikai és Sejtbiológiai IntézetSEJTEK TRANSZFEKTÁLHATÓSÁGÁNAK ÖSSZEFÜGGÉSE A LIPIDTUTAJOKKALA lipidtutajok olyan koleszterint és szfingolipideket tartalmazó membránmikrodomének, melyek számtalan fontos biológiai funkcióban játszanakszerepet. A jelölésükre leggyakrabban alkalmazott eljárás a tutajok detergensrezisztenciáján alapul, azonban az eredmények ellentmondásosak. Alternatívmegoldásként alkalmazzák a koleratoxinnal (CTX) történ jelölést: a CTX aszfingolipidek GM1 típusához kötdik, de keresztköti azokat, így valószínlegmegváltoztatja a tutajok szerkezetét.Mivel a glikozil-foszfatidilinozitol (GPI) csoporttal rendelkez fehérjék alipidtutajokban találhatók, alternatív módszerként használható a tutajok GPI-GFP plazmidos transzfekcióval történ jelölése. Kísérleteink során az volt acélunk, hogy összehasonlítsuk a sejtek GPI-GFP-vel és CTX-nal való jelölését.Liposzómás módszerrel, GPI-GFP plazmiddal transzfektált sejtek fluoreszcensmikroszkópos vizsgálata szerint a fehérjét jól expresszáló sejtek alig jelöldtekCTX-nal, míg sok CTX-t köt sejtek alig transzfektálódtak a plazmiddal.Eredményeinket kvantitatívvá akartuk tenni áramlási citometriás mérésekkel,ahol ugyan megfigyelhet volt a CTX jelölés szempontjából a két populáció, dea fentebb említett antikorrelációt nem tudtuk reprodukálni (valószínleg atripszinezés hatása miatt). Ezért inkább a fáradságosabb fluoreszcensmikroszkópos kiértékelés mellett döntöttünk, ami a jól expresszáló-CTX-nalnem jelöld és az alig expresszáló-CTX-nal jól jelöld populációk mellettegy harmadik szubpopulációt is feltárt, amiben pozitív korreláció volt a CTXjelölés és a GPI-GFP expresszió szintje között. Kísérleteinket elvégeztük GFPplazmiddal is, melyek szintén mutatták a fehérje expresszió és a CTX jelöldésközötti antikorrelációt. Mivel eredmények arra utalnak, hogy a lipid tutajokbefolyásolják a sejtek liposzómás módszerrel való transzfektálhatóságát,folyamatban lev kísérleteink során fluoreszcensen jelölt plazmiddal, lipidtutajtmódosító kezelésekkel és elektroporációs transzfekció alkalmazásávalellenrizzük a fenti megfigyeléseket. Vizsgálataink valószínsítik, hogy alipidtutajok az eddig ismert funkciók mellett befolyásolhatják a sejtektranszfektálhatóságát.Témavezet: Dr. Nagy Péter131