Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

MB1.5. Kerekes Éva Mol.Biol. V.Orvosi Vegytani IntézetA DROSOPHILA CG9238 GÉN FUNKCIÓJÁNAK VIZSGÁLATAA Drosophila genom program adatbázisában található CG9238 jel géntermékének elsdleges szerkezete jelents hasonlóságot mutat az emlsökbenelforduló R5 glikogén köt alegységhez, amely a protein foszfatáz 1 (PP1)katalitikus alegységéhez kötdve fejti ki hatását. A szerkezeti jóslat ellenrzéseérdekében éleszt két-hibrid módszerrel bebizonyítottuk, hogy a géntermékképes fehérje-fehérje kölcsönhatást kialakítani a Drosophilában elforduló PP1katalitikus alegység összes ismert izoformájával. A gén szerkezete alapjánfeltételezhet, hogy két fajta mRNS íródhat át róla. RT-PCR kísérlettel azttaláltuk, hogy Drosophila embriókban a két lehetséges mRNS közül csak arövidebb mRNS1 mutatható ki. A Drosophila egyedfejldés során ez az mRNSelssorban az embrió és lárva állapotokban fordul el. A gén funkciójánakmeghatározására felhasználtuk a gén 5’-nem kódoló régiójában P-elemethordozó EY10816 inzerciós mutánst. A P-elem jelenléte önmagában nembefolyásolta a gén átíródását. Ezért transzpozázzal mobilizáltuk a P-elemet. AP-elem kiugrása során véletlenszeren bekövetkez pontatlan kivágáseredményeként egy esetben jelents deléció jött létre a CG9238 génben. Adeléció méretét (2kb) PCR segítségével, pontos pozícióját DNS szekvenálássalhatároztuk meg. Azt találtuk, hogy a deléció eltávolítja a gén nem-kódolórégiójának egy részét, valamint az 1. és 2. exont. RT-PCR segítségéveligazoltuk, hogy a 10816/81 jel homozigóta deléciós mutánsból hiányzik aCG9238 mRNS. Rekombináns CG9238 protein ellen termeltetett poliklonálisellenanyag felhasználásával kimutattuk, hogy a CG9238 protein (az mRNS-elszemben) elssorban a bábokban halmozódik fel. Az antitest segítségéveligazoltuk, hogy a 10816/81 mutánsból a génnek megfelel protein is hiányzik.A deléciós mutáns életképes, de a vad típusú Drosophilákhoz képest kevesebbglikogént raktároz. Eredményeink alapján arra következtettünk, hogyDrosophilában a CG9238 gén terméke, szerkezetével összhangban, szerepetjátszik a glikogén anyagcsere szabályozásában.Témavezet: Dr. Dombrádi Viktor, Dr. Kókai Endre117