Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

MB2.1. Jóna Ádám ÁOK V.Anatómia, Szövet- és Fejldéstani IntézetA P2X4 IONOTROP PURINORECEPTOROK EXPRESSZIÓJÁNAKVIZSGÁLATA IN VITRO ÉS IN VIVO DIFFERENCIÁLÓDÓPORCSZÖVETBENA csirkeembriók végtagtelepeibl izolált chondrogenikus mezenchimálissejtekbl elállított primer high density kultúrák vizsgálata a porcdifferenciációtanulmányozásának egyik legszélesebb körben alkalmazott módszere. Az invitro pordifferenciáció során az intracelluláris szabad kalciumkoncentrációfontos szerepet játszik: szintje precízen szabályozott, a sejtekdifferenciálódásának idején – ami a kísérleti rendszerünkben a 3. napon zajlik –egy jelents citoszólikus kalciumkoncentráció-emelkedés mutatható ki, melynekf forrása az extracelluláris tér. Irodalmi adatok szerint az érett porcsejtekfelszínén különböz típusú purinoreceptorok vannak jelen, ezért megvizsgáltuk,hogy a high density kultúrák differenciálódó sejtjei is expresszálják-e ezeket afehérjéket. Laboratóriumunkban korábban kimutatták, hogy a chondrogenikussejtek a differenciálódás napján az intracelluláris kalciumszint emelésévelreagálnak az ATP adagolására. A tranziensek fiziológiai paraméterei alapján esejtválasz kiváltásában ionotrop P2X-receptorok szerepe tnt valószínnek. RT-PCR és Western blot analízis, valamint immuncitokémiai festések segítségévelmegállapítottuk, hogy a P2X4-receptor lehet az egyik ioncsatorna, amely adifferenciálódás napján átmenetileg megemelkedett citoszólikuskalciumkoncentrációhoz szükséges kalcium-influxot biztosíthatja. A highdensity sejtkultúrák sejtjeivel hozzávetlegesen megegyez korú csirkeembriókfejld végtagjaiban lév porctelepeket fluoreszcens immunhisztokémiaimódszerekkel megfestve megállapítottuk, hogy a P2X4-receptor nemcsak az invitro modellben, hanem in vivo is expresszálódik. A P2X4-receptorokat a fiatalporcsejtek ersebben, a teljesen érett porcsejtek, melyek a porctelepekbelsejében voltak, gyengébben expresszálták. Vizsgálataink alapján tehát aP2X4-receptor mind az in vitro, mind pedig az in vivo differenciálódóporcsejtek membránjában jelen van, és a kalcium-homeosztázis egyikregulátoraként feltehetleg szerepet játszik a sejtek differenciálódásánakszabályozásában.Témavezet: Dr. Zákány Róza, Matta Csaba107