A tantárgy/kurzus neve:Hisztológia alapjai I.A kurzus típusa:előadás + gyakorlatA tantárgy/kurzus száma: Félév:EFH 46012. félévÓraszám/hét: 1 + 1 Kreditek száma: 2Előadótanár: Dr. Kern Mária főiskolai docensIntézet/Tanszék:DE-OEC EFK Orvos<strong>diagnosztikai</strong> Laboratóriumi Analitikus Szak4012 Debrecen, Nagyerdei krt. 98 Tel.: (52) 411-717/55332A kurzus státusa a tanulmányi programon belül:Kötelező kurzus az alapozó tantárgyak között.A kurzus célja:A kurzus célja az alapvető hisztotechnikai ismeretek elsajátíttatása, melynek révén a hallgatómegismerheti a fénymikroszkópok működésének elveit és kezelését, a hisztotechnika elméletiés gyakorlati alapjait a szövettani mintavételtől a legfontosabb hisztológiai festésekig, hisztológiailaboratóriumban végzett önálló tevékenységgel.A kurzus leírása:Főbb témakörök: Az optikai mikroszkóp működése, részei. A fluorescens, fáziskontraszt, polarizációsés invert mikroszkóp működése. A szövettani mintavétel, a minta rögzítése, a fixálokösszetétele és hatása. A decalcinálási módszerek, a beágyazás. A mikrohullámú készülékműködése. A paraffinos és kriosztásos metszetkészítés. A fagyasztva szárítási eljárás és felhasználásiterületei. A festékek definíciója, a szövettani festési módszerek általános elvei,egyes festések specifitása.Követelmények:Részvétel az előadásokon: az aláírás megtagadható, ha a hiányzások száma meghaladja ahármat. Részvétel a gyakorlatokon. A hallgató köteles gyakorlati jegyzőkönyvet vezetni, afélév végén a gyakorlati jegyzőkönyv értékelésre kerül.Előfeltételek:A középiskolás biológia és fizika megfelelő szintű ismerete, biológiából tett sikeres felvételi.vizsga. A Funkcionális anatómia tantárgy sikeres teljesítése.Oktatási segédeszközök:Írásvetítő, videoprojektor. Normál fénymikroszkóp, polarizaciós, fluorescens és invert mikroszkópok,audiovizuális hálózat. Hisztológiai laboratóriumi eszközök, vegyszerek a metszéshez,beágyazáshoz és a különböző festésekhez.Vizsgáztatási módszer:A szemeszter végén írásbeli kollokvium.Kell-e jelentkezni a kurzusra?A félév elején a hallgató felveszi leckekönyvébe a tantárgyat.Értékelés:Az írásbeli kollokvium 50% teljesítménytől sikeres.Kötelező irodalom:Módis László: Hisztológia. (Hisztotechnika) Oktatási anyag az orvos<strong>diagnosztikai</strong> laboratóriumianalitikus képzéshez. DOTE Anatómiai, Szövet- Fejlődéstani Intézet, Debrecen, 1998.Ajánlott irodalom:Hadházy Cs: Szövettani gyakorlatok. Főiskolai jegyzet. DOTE Egészségügyi Főiskola, Nyíregyháza,1995.Krutsay M.: Pathológiai technika. Medicina Rt., Budapest, 1999.Tanka D.(szerk.): Hisztokémia-immunhisztokémia. Jegyzet. Egészségügyi SzakdolgozókKözponti Továbbképző Intézete, Budapest, 1978.48
Hisztológia alapjai I. Részletes tematika:1.hét Az optikai mikroszkóp működési elve. Az optikai mikroszkóp mechanikus és optikai elemei. A kollektor,a kondenzor, az objektív és az okulár fogalma. A numerikus appertura meghatározása. A mikroszkóp felbontóképessége,az Abbé féle egyenlet. Az objektívek lehetséges hibái, a színi és gömbi eltérés fogalma, korrekcióslehetőségek. /Előadás/2.hét A közönséges fénymikroszkóp használatának gyakorlása. A mikroszkóp optikai centrálása Köhler szerint.A tárgyasztal használata. A makro- és mikrométer csavarok megkülönböztetése, a tárgy képének élesre állítása.A kondenzor használata. Az okulár beállítása a szem optikai hibájának korrigálására. A tárgy vizsgálatának gyakorlása,az objektivek használata, beleérve az immerziós objektívet is. /Gyakorlat/3.hét A fluorescens, a fáziskontraszt, a polarizációs és az invert mikroszkópok működési elve, fizikai alapjaik.Használatuk területei, az általuk vizsgálható biológiai anyagok jellemzői. A vizsgálandó preparátumok esetlegeselőkészitése. Fluorescens festékekkel végzett reakciók , a topo-potikai reakciók lényege, elveik. Fluorescens,fáziskontraszt, polarizációs, és invert mikroszkópok megtekintése működés közben. /Gyakorlat/4.hét Demonstráció a mikroszkópokról tanultakból.A szöveti mintavétel módjai /biopsia, necropsia/. A minta rögzítésének általános elvei. A paraffinos beágyazásegyes lépései, a folyamat elméleti háttere. /fixálás, mosás, dehidrálás, beágyzás paraffinba/. /Előadás/5.hét A fontosabb fixálálok össszetétele, hatásmechanizmusa. Az egyes fixatív anyagok sajátosságai. -etanol,metanol, aceton, ecetsav, trichlorectsav, picrinsav, formaldehid, gutaraldehid, higanyclorid, osmium tetroxid –alkalmazásuk módja. /Előadás/6.hét Kemény szövetek fixálása és dekalcinálása, dekalcinálási módszerek ( szerves, szervetlen savak, kelátképzők).A fixálók eltávolítása, víztelenítés és paraffinba ágyazás elmélete. A beágyzás különböző módjai, paraffinosblock készítése. Mikrotómok, mikrotómkések. /Előadás/7.hét Paraffinos metszet készítése. A tárgylemezek előkészítése, tisztítása és coatingolása, silanizálás. Metszetkészítés kerekes és szánkás mikrotommal. A metszetek terítése, különböző módszerekkel. A kész paraffinosmetszet szárítása termosztátban. /Gyakorlat/8.hét Demonstráció a paraffinos beágyzás és metszetkészítés menetébőlFagyasztott, kriosztátos metszet készítése. A minta fagyasztása kkülönböző módon, a fagyasztott minta metszésea kriosztátban. A metszés gyakorlása, a kriosztát egyes funkcióinak értelmezése, gyakorlása. /Gyakorlat/9.hét A fagyasztva szárítási eljárás elmélete, felhasználási területei. A hisztopathológiai vizsgálatra küldöttanyagok feldolgozási lehetőségei, az anyag nyílvántartásának módja, kódolása, archiválásának módja, az errevonatkozó rendelkezések. /Előadás/10.hét A festék fogalmának definiciója, a festékek csoportosítása kémiai szerkezetük alapján (anionos és kationosfestékek). A basophilia és acidophilia fogalma. A szövettani festési módszerek néhány fontosabb alapelve,specifitása. Mag- és plazmafestések. Speciális festések, impregnációk elmélete. A metachomásia fogalma. Vitálisfestések elmélete. /Előadás/11.hét Demonstráció a festések elméletébőlA haematoxylin-eosin festés gyakorlati kivitelezése paraffinos metszeten, rendelkezésre álló recept alapján./Deparaffinálás, magfestés, majd plasmafestés, víztelenítés, derítés, fedés/. Az elkészített metszet mikroszkóposértékelése, az elvégzett munka és a kapott eredmény leírása jegyzőkönyv szerüen. /Gyakorlat/12.hét Van Gieson és picrosirius vörös festések, elasztika festéssel kombinálva, a megadott protokolok alapján.A fetéseket paraffinos éa kriosztátos metszeten egyaránt végezhetik a hallgatók. A kapott eredmények mikroszkóposértékelésénél ki kell térnie a hallgatónak az egyes festésekkel kapott mikroszkópos kép összehasonlítására,jegyzőkönyv készítése. /Gyakorlat/13.hét Gömöri –féle ezüst impregnáció a rácsrostok feltüntetésére a kapott recept alapján. A reakcióhoz frissenkészítendő oldatok elkészítése. Az impregnáció elméletének átismétlése.A kapott eredmények mikroszkópos értékelése, jegyzőkönyv készítés. /Gyakorlat/14.hét Azan festés: a megelőző pácolás után folytatva a reakciót a magfestéssel termosztátban, majd ezt követőenujabb pácolás 1-3 óra, majd a rostfestés. A pácolás alatt lenyomatok készitése és a lenyomatokon, valamintparaffinos metszeteken May Grünwald Giemsa fetés elvégzése egy adott recept alapján. Az Azan festés befejezéseután a preparátumok mikroszkópos értékelése, jegyzőkönyv készítés. /Gyakorlat/49