Ph.D. értekezés BECKER KRISZTINA - Semmelweis Egyetem ...
Ph.D. értekezés BECKER KRISZTINA - Semmelweis Egyetem ... Ph.D. értekezés BECKER KRISZTINA - Semmelweis Egyetem ...
Mutáció analízis Konformáció szenzitív gélelektroforézis A TGM1 gén teljes kódoló állományát amplifikáltuk. Az elvégzett heteroduplex analízis az 5-6 exont és a 7 exont tartalmazó PCR termékek eltérõ vándorlási sebességét mutatta. (27.ábra) 27. ábra LI-KK (a) 5-6 exont és (b) 7 exont tartalmazó PCR termékének conformáció szenzitív gél-elektroforézise mindkét terméknél 'shift' kialakulását mutatja (C=egészséges kontroll, P=proband) Szekvencia analízis A proband 5-6. exonját tartalmazó PCR részlet direkt nukleotid szekvenálása az 5. intron acceptor hasítási területén heterozygóta A→G szubsztitúciót mutatott 3366. nukleotid pozícióban. A 7. exont tartalmazó PCR fragmens vizsgálata G4073C transverziót mutatott, mely a 378. kodonban valin (GTC)→ leucin (CTC) aminosavcseréhez vezet, jelölése V378L. A nukleotidok számozását a Kim és mtsai által közölt szekvenciának megfelelõen végeztük. (21) (28.ábra) Allél specifikus PCR vizsgálat a b C P C P Mivel a kérdéses mutációk restrikciós hasítással nem voltak vizsgálhatók, allél specifikus PCR vizsgálatot végeztünk, melynek során a mutáció által érintett szakaszokra terveztünk primereket. Az allél-specifikus PCR analízis igazolta, hogy a 48
a b N 28. ábra LI-KK direkt szekvencia analízise (a) az intron 5 acceptor hasítási helyén A3366G tranzíciót mutatott (reverz szekvencia látható) (b) A 7. exonban G4073C transzverziót észleltünk, mely a 378. kodonban valin (GTC)→ leucin (CTC) aminosavcseréhez vezet. A felsõ görbék a mutáns, alsó görbék a kontroll szekvenciát mutatják. P C a 29. ábra LI-KK allél specifikus PCR vizsgálata. A mutáns szekvenciákra tervezett primer pár csak a proband (P) DNS-ével generált 252 bp illetve 275 bp hosszúságú terméket, a normál kontroll DNS amplifikációjakor (C) PCR termék nem keletkezett. (a) A3366G (b) G4073C 49 N P C b
- Page 1 and 2: SEMMELWEIS EGYETEM DOKTORI ISKOLA M
- Page 3 and 4: Tartalomjegyzék 1. Összefoglalás
- Page 5 and 6: 1. ÖSSZEFOGLALÁS Ichthyosisok ult
- Page 7 and 8: 2. BEVEZETÉS A genetikai kutatáso
- Page 9 and 10: 3. CÉLKITÛZÉSEK Az ichthyosisok
- Page 11 and 12: Elektronmikroszkópos vizsgálattal
- Page 13 and 14: Az X-hez kötött recesszív ichthy
- Page 15 and 16: 7.ábra Epidermolytikus palmoplanta
- Page 17 and 18: 2.2 NON-BULLOSUS CONGENITALIS ICHTH
- Page 19 and 20: A kimutatható specifikus ultrastru
- Page 21 and 22: parakeratosisban, psoriasisban, tü
- Page 23 and 24: 3. TÁRSULT ICHTHYOSISOK 3.1 X-HEZ
- Page 25 and 26: Netherton syndromának bizonyul. Eg
- Page 27 and 28: 17. ábra Neutrális lipid tárolá
- Page 29 and 30: Kórjelzõek a neurológiai tünete
- Page 31 and 32: arrierváltozáshoz vezethet. Ugyan
- Page 33 and 34: további, a betegséghez köthetõ,
- Page 35 and 36: 5.1. KLINIKAI ADATOK 5. KLINIKAI AD
- Page 37 and 38: késõbb megszûnt. Csecsemõkorban
- Page 39 and 40: fokú erythroderma mellett kiselem
- Page 41 and 42: 5.1.2.TÁRSULT ICHTHYOSISOK 5.1.2.1
- Page 43 and 44: 24. ábra X-domináns ichthyosis (I
- Page 45 and 46: Cambridge Ltd UK) végeztük. A 40
- Page 47: 6. EREDMÉNYEK 6.1 AUTOSZOMÁLIS RE
- Page 51 and 52: 31. ábra LI-ZM direkt szekvencia a
- Page 53 and 54: Mutáció analízis Konformáció s
- Page 55 and 56: Transzglutamináz aktivitás in sit
- Page 57 and 58: mitochondriumoknak, esetleg tágult
- Page 59 and 60: Szekvencia analízis A proband 7. e
- Page 61 and 62: 41.ábra CIE-BE ultrastrukturális
- Page 63 and 64: 45.ábra (a) A kis nagyítású ele
- Page 65 and 66: 44. ábra I-MA. A bõrbõl végzett
- Page 67 and 68: 7. MEGBESZÉLÉS 7.1 AUTOSZOMÁLIS
- Page 69 and 70: analízis vizsgálatok arra utalnak
- Page 71 and 72: megváltozott gömbstruktúrával s
- Page 73 and 74: Fontos, de a klinikai kép alapján
- Page 75 and 76: 7.3 AZ ELEKTRONMIKROSZKÓPOS VIZSG
- Page 77 and 78: alapján nem besorolható, vagy té
- Page 79 and 80: A helyesen diagnosztizált és pont
- Page 81 and 82: 10. IRODALOM 1. Akiyama M, Takizawa
- Page 83 and 84: 22. Kim SY, Kim IG, Chung SI, Stein
- Page 85 and 86: congenital ichthyosiform erythroder
- Page 87 and 88: 11. AZ ÉRTEKEZÉS TÉMÁJÁBAN MEG
- Page 89: 6. Becker K. A gyermekbõr ápolás
Mutáció analízis<br />
Konformáció szenzitív gélelektroforézis<br />
A TGM1 gén teljes kódoló állományát amplifikáltuk. Az elvégzett heteroduplex analízis<br />
az 5-6 exont és a 7 exont tartalmazó PCR termékek eltérõ vándorlási sebességét mutatta.<br />
(27.ábra)<br />
27. ábra LI-KK (a) 5-6 exont és (b) 7 exont tartalmazó PCR termékének conformáció<br />
szenzitív gél-elektroforézise mindkét terméknél 'shift' kialakulását mutatja<br />
(C=egészséges kontroll, P=proband)<br />
Szekvencia analízis<br />
A proband 5-6. exonját tartalmazó PCR részlet direkt nukleotid szekvenálása az 5.<br />
intron acceptor hasítási területén heterozygóta A→G szubsztitúciót mutatott 3366.<br />
nukleotid pozícióban. A 7. exont tartalmazó PCR fragmens vizsgálata G4073C<br />
transverziót mutatott, mely a 378. kodonban valin (GTC)→ leucin (CTC)<br />
aminosavcseréhez vezet, jelölése V378L. A nukleotidok számozását a Kim és mtsai<br />
által közölt szekvenciának megfelelõen végeztük. (21) (28.ábra)<br />
Allél specifikus PCR vizsgálat<br />
a b<br />
C P C P<br />
Mivel a kérdéses mutációk restrikciós hasítással nem voltak vizsgálhatók, allél<br />
specifikus PCR vizsgálatot végeztünk, melynek során a mutáció által érintett<br />
szakaszokra terveztünk primereket. Az allél-specifikus PCR analízis igazolta, hogy a<br />
48
Change language