értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola

XIII. táblázat A védőhatás vizsgálatának kísérleti elrendezése és a fertőzési csíraszámok
Vakcina törzs Challenge törzs
Csoport
Név Fertőzés
[CFU/csibe]
Név Fertőzés
[CFU/csibe]
1. Vakcina kontroll 1 SE11 Spc R 10 8 - -
2. Principális 1 SE11 Spc R 10 8 SE 147 Nal R 10 5
3. Challenge kontroll - - SE 147 Nal R 10 5
4. Principális 2 SE ∆155 Cm R 10 8 SE 147 Nal R 10 5
5. Vakcina kontroll 2 SE ∆155 Cm R 10 8 - -
A kísérleti minták feldolgozása a szerv inváziós és kolonizációs vizsgálatokhoz képest néhány
kisebb módosítással történt. A vakbéltartalom feldolgozása a korábbiakhoz hasonlóan zajlott;
a vakcina kontroll csoportoknál spektinomicin és kloramfenikol tartalmú, míg a ráfertőzött
(„challengelt”) csoportok esetében nalidixinsav tartalmú RV dúsítót és BTK táptalajt
használtunk a hígítás illetve kioltás során, hogy mind a „vakcina”, mind a „challenge” törzs
csíraszámát meghatározhassuk. Hasonlóan jártunk el a máj mintákkal is, melyeket egy
homogenizálási lépés után a vakbéltartalomhoz hasonlóan hígítottunk és titráltunk. A máj
homogenizálását steril műanyag tasakban, 50-szeres mennyiségű RV dúsítóban, Stomacher
(Seward Stomacher 80 Biomaster) homogenizátorral végeztük. A lép minták feldolgozás az
előkísérletekben leírtaknak megfelelően zajlott, kivéve a 48 órás kioltásokat, amelyet ezúttal
elhagytunk.
A bakteriológiai mintavételi eljárást kiegészítettük a kloákatamponok gyűjtésével, melyet a
többi vizsgálattal egyidőben végeztünk úgy, hogy a feldolgozásra került állatoknak mindig
legyen kloákatampon eredménye is. A mintavételre kereskedelmi forgalomban kapható, steril
fültisztítót használtunk, melyet mintavétel után RV dúsítóban inkubáltunk 24 órán át, majd
ebből antibiotikumos BTK-ra szélesztettünk, így vizsgálva a madarak Salmonella ürítését.
A kísérleti állatok első hatos csoportját a fertőzést követő ötödik napon dolgoztuk fel. Ezt
követően minden újabb hét elteltével megismételtük a feldolgozást a fenti séma szerint,
mindig 6-6 állatot felhasználva csoportonként, egészen a negyedik hétig.
A negyedik hét végén, az utolsó feldolgozás alkalmával a Vakcina kontroll csoportokban vért
vettünk, az állatok Salmonella flagellin specifikus immunválaszát tesztelendő. A savókat
szendvics blokkoló ELISA-val (DAS ELISA) (van Zijderveld és mtsai., 1993), a S. Enteritidis
83