értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola

4.4. Megbeszélés
Egyes szerovarokhoz tartozó Salmonella törzseket általában jellemzi egy olyan nagyméretű
virulencia plazmid, mely a szisztémás fertőzés kialakításában lényeges szerepet játszhat. A
Salmonella virulencia plazmidok mérete széles határok (50-90 kb) között változhat; a S.
Enteritidis esetében 60 kb méretűek. A plazmidok alacsony kópiaszámban vannak jelen a
sejtben, replikációjuk és utódsejtekbe való továbbjutásuk (partíciójuk) szigorúan szabályozott.
A plazmidon elhelyezkedő legfontosabb virulencia determináns a konzervált spv régió, amely
minden – ilyen plazmiddal bíró - szerovariáns virulencia plazmidján jelen van, és
legfontosabb szerepe, hogy a baktériumnak a gazda nyirokszerveiben való szaporodását
biztosítsa.
Több forrásból ismert, hogy a virulencia plazmidok hiánya a szisztematikus fertőzés
kialakulását a melegvérű állatok szervezetében jelentősen megnehezíti. Bízva abban, hogy ez
a virulencia csökkenés az általunk előállított, flagellinhiányos SE2102 (Salmonella Enteritidis
11 származék) vakcina jelöltben is bekövetkezik, elhatároztuk a virulencia plazmid kiűzését a
törzsből.
Plazmidűzési eljárásként először a hagyományos etídium-bromidos táplevesben való
passzálást alkalmaztuk, amelyet egy párhuzamos kísérlet keretében magas hőmérsékleten való
tenyésztéssel egészítettünk ki. Az etídium-bromid, mint interkaláló ágens gyenge
mutagénként és általános stressz faktorként DNS replikációs nehézségeket okozhat a
baktériumnak. Ezzel azoknak a sejteknek a szelekcióját eredményezheti, melyek elveszítik az
in vitro szaporodási körülmények között felesleges virulencia plazmidot, így téve szert rövid
távú szaporodási előnyre. Újabb stressz faktorként reményeink szerint ehhez járult hozzá a
magas hőmérséklet, és a szokásosnál hosszabb/rövidebb stacioner fázis.
A szóbanforgó plazmid jelenlétének nyomonkövetésére az egyik legfontosabb plazmidon
kódolt virulencia gént, az spvC-t használtuk, s jelenlétét PCR-rel teszteltük. Azért ezt a
szakaszt választottuk, mert úgy gondoltuk, hogy ettől a virulencia géntől mindenképpen meg
kell szabadulni ha virulencia csökkenést akarunk elérni. Így lehet ugyan, hogy esetleg
elszalasztunk egyéb deléciós virulencia plazmid származékokat (lásd 15. ábra, 5. minta), de
ha azok hordozzák az spvC gént, akkor számunkra nem annyira jelentősek, hogy megérné
komplikáltabb módszerrel is keresni azokat.
72