értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
4.4. Megbeszélés<br />
Egyes szerovarokhoz tartozó Salmonella törzseket általában jellemzi egy olyan nagyméretű<br />
virulencia plazmid, mely a szisztémás fertőzés kialakításában lényeges szerepet játszhat. A<br />
Salmonella virulencia plazmidok mérete széles határok (50-90 kb) között változhat; a S.<br />
Enteritidis esetében 60 kb méretűek. A plazmidok alacsony kópiaszámban vannak jelen a<br />
sejtben, replikációjuk és utódsejtekbe való továbbjutásuk (partíciójuk) szigorúan szabályozott.<br />
A plazmidon elhelyezkedő legfontosabb virulencia determináns a konzervált spv régió, amely<br />
minden – ilyen plazmiddal bíró - szerovariáns virulencia plazmidján jelen van, és<br />
legfontosabb szerepe, hogy a baktériumnak a gazda nyirokszerveiben való szaporodását<br />
biztosítsa.<br />
Több forrásból ismert, hogy a virulencia plazmidok hiánya a szisztematikus fertőzés<br />
kialakulását a melegvérű állatok szervezetében jelentősen megnehezíti. Bízva abban, hogy ez<br />
a virulencia csökkenés az általunk előállított, flagellinhiányos SE2102 (Salmonella Enteritidis<br />
11 származék) vakcina jelöltben is bekövetkezik, elhatároztuk a virulencia plazmid kiűzését a<br />
törzsből.<br />
Plazmidűzési eljárásként először a hagyományos etídium-bromidos táplevesben való<br />
passzálást alkalmaztuk, amelyet egy párhuzamos kísérlet keretében magas hőmérsékleten való<br />
tenyésztéssel egészítettünk ki. Az etídium-bromid, mint interkaláló ágens gyenge<br />
mutagénként és általános stressz faktorként DNS replikációs nehézségeket okozhat a<br />
baktériumnak. Ezzel azoknak a sejteknek a szelekcióját eredményezheti, melyek elveszítik az<br />
in vitro szaporodási körülmények között felesleges virulencia plazmidot, így téve szert rövid<br />
távú szaporodási előnyre. Újabb stressz faktorként reményeink szerint ehhez járult hozzá a<br />
magas hőmérséklet, és a szokásosnál hosszabb/rövidebb stacioner fázis.<br />
A szóbanforgó plazmid jelenlétének nyomonkövetésére az egyik legfontosabb plazmidon<br />
kódolt virulencia gént, az spvC-t használtuk, s jelenlétét PCR-rel teszteltük. Azért ezt a<br />
szakaszt választottuk, mert úgy gondoltuk, hogy ettől a virulencia géntől mindenképpen meg<br />
kell szabadulni ha virulencia csökkenést akarunk elérni. Így lehet ugyan, hogy esetleg<br />
elszalasztunk egyéb deléciós virulencia plazmid származékokat (lásd 15. ábra, 5. minta), de<br />
ha azok hordozzák az spvC gént, akkor számunkra nem annyira jelentősek, hogy megérné<br />
komplikáltabb módszerrel is keresni azokat.<br />
72