értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola

4.3. Eredmények
4.3.1. Előzetes eredmények
Az előző fejezetben tárgyalt irányított transzpozon mutagenezis rendszerrel sikerült négy nem
mozgó Salmonella Enteritidis 11 törzset létrehoznunk. Ezek közül háromnak (SE11/2102,
2107, 2520) az inszerció pontos helye is ismert volt, így ezekkel dolgoztunk tovább. Első
lépésként szükségesnek láttuk a mutánsokban még jelenlévő, fúziós transzpozáz termelő
pFOL1111 plazmid kiűzését. Erre több okból is szükség volt: (i) a transzpozáz jelenlétében
fennállt a veszélye az esetleges további genetikai átrendeződéseknek a vakcina jelölt
törzsekben, (ii) a tervezett genetikai beavatkozásokhoz szükségünk volt az ampicillin
markerre (amelyet a pFOL1111, a flagellin bénítás során használt fúziós transzpozáz termelő
plazmid is hordoz), (iii) a soron következő állatkísérletre való tekintettel az antibiotikum
rezisztens plazmid jelenlétét nem tartottuk kívánatosnak. A plazmid űzését a hagyományos,
etídium-bromidos passzálási módszerrel hajtottuk végre. Öt passzálási lépés után a
megvizsgált telepek mindegyike ampicillinre érzékeny volt mindhárom mutáns esetében (100,
vagy több megvizsgált telep között nem találtunk rezisztens kolóniát) – vagyis a transzpozáz
termelő plazmid nagy hatékonysággal eliminálódott.
A következő lépésként naposcsibe modellen hasonlítottuk össze a nem mozgó mutánsok és a
szülői törzs virulencia tulajdonságait (részletesen lásd: 5. fejezet). Ezen előzetes vizsgálatok
alapján a három törzs között naposcsibe szerv-inváziós tulajdonságaik tekintetében nem
mutatkozott lényeges eltérés, míg a legmagasabb vakbél titert a SE11/2102 törzs érte el, így a
további kísérletek céljából ezt a mutánst választottuk ki.
4.3.2. Virulencia plazmid űzési eredmények hagyományos módszerekkel
A Salmonella virulencia plazmid kiűzését a nem mozgó SE11/2102 törzsből elsőként a
hagyományos, etídium-bromidos táplevesben való passzálással, magas, szubletális
hőmérsékleten való passzálással, valamint ezek kombinációjával próbáltuk elérni.
A plazmidot hordozó törzset négy különböző koncentrációjú (20, 30, 40 és 50 µg/ml) EtBr-ot
tartalmazó táplevesbe oltottuk. Az inkubálást 37 ºC-on és szubletális hőmérsékleten (41-43
ºC) végeztük álló és rázatott tenyészettel egyaránt. A törzset naponta friss, rázatott EtBr-os
63