értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
4.2. Anyagok és módszerek<br />
4.2.1.Baktériumtörzsek<br />
S17-1 λ pir: Escherichi coli K-12 konjugatív törzs, pro thi recA λpir hsdR (r - m + ) Tp R Sm R<br />
[Ω RP4-2-Tc::Mu-Km::Tn7] (Simon és mtsai, 1983)<br />
SE2102: A Salmonella Enteritidis 11 E 296 (SE11), 1-es fágtípusú, baromfi eredetű vad törzs<br />
nem mozgó származéka, mely inszerciót hordoz a fliD génben (fliD::pFOL1069), Cm R .<br />
4.2.2. Táptalajok, antibiotikumok<br />
Bakteriális táptalajként LB tápfolyadékot és agart (Sambrook és mtsai., 1989) használtunk.<br />
Elektroporálás után a sejtek regenerálásához SOC médiumot használtunk. Az<br />
antibiotikumokat (Sigma) minden esetben az alábbi koncentrációban használtuk: ampicillin<br />
(Ap): 150 µg/ml, kloramfenikol (Cm): 20 µg/ml, kanamycin (Km): 20 µg/ml.<br />
4.2.3. Plazmidok<br />
pJKI132: (Farkas és mtsai., 1996) Ap R , replikációs origója: colE1. A pAW380 (Stalder és<br />
mtsai., 1989) plazmid származéka, tartalmazza a lacI q gént és az IS30 transzpozáz nyílt<br />
leolvasási keretét a tac promóter kontrollja alatt.<br />
pJKI336: Ap R , Km R , replikációs origója: R6K, RP4 oriT. A pLOFKm (Herrero és mtsai.,<br />
1990) plazmid származéka, hordozza az IS10 transzpozáz nyílt leolvasási keretét a tac<br />
promóter kontrollja mellett. Ezenkívül tartalmazza a mini-Tn10 transzpozont, amelyben a<br />
Km R gén és az összekapcsolt IS30 IR végek az IS10 elem két bal oldali vége által határolva<br />
helyezkednek el (Caspers és mtsai., 1984).<br />
4.2.4. Standard mikrobiológiai és molekuláris biológiai eljárások<br />
Az itt nem részletezett molekuláris biológiai módszereket az előző fejezet anyag és módszer<br />
részében leírtak szerint (3.2.4.) alkalmaztuk.<br />
59
Change language