értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola

7. ábra A transzpozíciós donor pFOL1069 plazmid szerkezete. A kostrukció tartalmazza a
reaktív (IS30)2 intermedier struktúrát, a konjugációért felelős mob géneket és a kloramfenikol
rezisztencia gént. Replikációs origója a defektív R6K, amelynek működéséhez a λ-pir
funkciók szükségesek.
IS30 intermedier
3.3.3. Irányított mutagenezis kísérletek
Mob funkciók
def R6K rep. ori.
A rendszer elméleti működését az 8. ábra szemlélteti, mely szerint a mutagenezis kísérleteket
a következőképpen végeztük.
A fúziós transzpozázt termelő pFOL1111 konstrukciót (Ap R ) elektroporációval bejuttattuk az
SE11 Salmonella Enteritidis törzsbe. Hogy megbizonyosodjunk arról, hogy a transzpozáz
fehérje IPTG indukció hatására termelődik, a sejteket IPTG indukció után feltártuk és SDS-
PAGE gélelektroforézissal győzödtünk meg a transzpozáz fehérje indukciójáról. Ez
megteremti a feltételét annak, hogy ha konjugációval bejuttatjuk a pFOL1069 integrációs
donor konstrukciót is (amely nem tartalmaz transzpozáz gént, s nem képes replikációra
Salmonella törzsekben), akkor az integrálódni fog a bakteriális kromoszómára. Az integrációt
a Ap R , Cm R Salmonella telepek megjelenése jelzi.
42
CmR CmR