értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
leolvasási keretben a PstI hasítóhelyet – ez a konstrukció a pFOL1070. A pFOL1070 PstI<br />
helyére klónoztuk az fljA gént tartalmazó PCR fragmentet.<br />
Bizonyítandó, hogy a klónozott fljA gén nem tartalmaz mutációt és a megfelelő leolvasási<br />
keretben csatlakozik az IS30 transzpozáz génhez, az fljA szekvenciáját meghatároztuk és<br />
számítógépes szekvencia-analízissel ellenőriztük.<br />
tac<br />
lacIq lacIq fljA-IS30 fúzió<br />
6. ábra A fúziós transzpozázt termelő pFOL1111 plazmid szerkezete. Az ampicillin<br />
rezisztencia markerrel ellátott plazmid a tac promóter kontrollja mellett termeli a fúziós FljA-<br />
IS30 fehérjét.<br />
Az integrációs donor szekvenciának egyrészt tartalmaznia kell a transzpozícióban aktív<br />
(IS30)2 struktúrát (de aktív transzpozáz nélkül), másrészt egy marker gént. Célszerű, ha a<br />
konstrukció konjugatív plazmid, azaz képes átjutni a mutagenizálni kívánt baktériumba, ám<br />
ott nem képes replikációra. Ezek a járulékos tulajdonságok a későbbi tesztelési eljárásokat<br />
nagy mértékben megkönnyítik, mivel nem kell számolni a plazmid fennmaradásával.. Ezért<br />
mi a pLOFKm alap plazmidból (Herrero és mtsai, 1990) több lépésben állítottuk elő a<br />
felhasználni kívánt konstrukciót, a konjugatív pFOL1069 plazmidot, mely Cm R rezisztenciát<br />
hordoz. Ez a konstrukció csak az S17-1 λ-pir E. coli törzsben képes replikációra, más E. coli<br />
törzsekben és Salmonella Enteritidisben nem (7. ábra).<br />
41<br />
ApR ApR IS30 fljA
Change language