értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
7. Konjugációs lépés: összekevertünk 100 µl donor és 100 µl recipiens tenyészetet steril<br />
üvegbottal egy antibiotikum mentes LB agar felszínén. Kontrollként a donor és a recipiens<br />
törzs színtenyészetét külön is szélesztettük.<br />
8. Inkubáció, 37°C, 5 óra<br />
9. Az öt óra alatt kinőtt baktérium pázsitot 3 ml steril fiziológiás sóoldattal lemostuk, majd<br />
tízes léptékű hígítási sort készítettünk négy lépésig.<br />
10. Az egyes (1., 2., 3. és 4.) hígítási lépésekből Ap, Cm tartalmú LB lemezekre100-100 µl-t<br />
szélesztettünk.<br />
11. Inkubáció, 37°C, O/N<br />
12. A konjugáció eredményeként kinőtt izolált telepeket megszámoltuk, hogy meghatározzuk<br />
az összes, a donor, a recipiens és a transzkonjugánsok csíraszámát, majd a transzkonjugáns<br />
telepeket steril fogpiszkálóval átoltottuk Ap, Cm tartalmú LB lemezekre, hogy az esetleges<br />
donor és recipiens maradványoktól biztosan megszabaduljunk.<br />
3.2.7. Motilitás teszt<br />
A transzpozon mutagenezis eredményeként kinőtt Ap R és Cm R Salmonella Enteritidis<br />
mutánsok mozgásképességét lágyagaros teszttel vizsgáltuk. Az egyes mutánsokat az izolált<br />
telepről levágott végű tűszerű oltókaccsal szelektív (Ap + Cm) LB 0,1% agart tartalmazó<br />
csövek felső harmadába szúrtuk. 24 óra 37 o C-on történő inkubálás után a baktériumok<br />
mozgásképességét vizsgáltuk.<br />
39