értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola

FljA represszor felismerő helye – és annak közvetlen környezetében lévő flagellin génekre
irányítani.
A transzpozíció irányultságát biztosító fúziós fehérje tehát a következő két esszenciális
doménből állt:
i.) DNS kötő domén: FljA represszor fehérje mely felelős a fliC operátor
célszekvencia felismeréséért.
ii.) A transzpozáz domén: IS30 transzpozáz fehérje, amely az integráció
lejátszódásáért felelős.
Maga a rendszer három funkcionális komponensből állt:
1.) Célszekvencia: fliC operátor, amely megfelel az FljA represszor fehérje által
felismerendő szekvenciának. Ez a szekvencia a fliC és fliD gének által határoltan
helyezkedik el a Salmonella kromoszómán.
2.) A fentebb ismertetett FljA-IS30 fúziós fehérje, amely egy e célból bejuttatott plazmid
DNS-ről szintetizálódik és az integrációs donor szekvencia beépítését végzi a
célszekvenciába.
3.) Integrációs donor szekvencia, amely a transzpozáz aktív helyét (az (IS30)2 struktúra)
egy marker génnel (Cm R ) kapcsoltan tartalmazza, s egy második, „donor” plazmidon
helyezkedik el (lásd később az 5. ábrán). Ez a plazmid integrálódik a célszekvenciába.
Célok
A fenti mutagenezis rendszerrel végzett kísérleti munka célja egy megfelelő negatív fehérje
markerrel ellátott Salmonella Enteritidis mutáns előállítása volt, amely a munka későbbi
fázisában egy élő, orális baromfi vakcina alapjául szolgálhat. A mutagenezis célpontját a H
antigén termelődésért felelős flagellin gének – elsősorban a fliC operátor és környezete –
jelentik A feladatot egy új megközelítéssel – irányított transzpozícióval – terveztük
végrehajtani.
34