értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
FljA represszor felismerő helye – és annak közvetlen környezetében lévő flagellin génekre<br />
irányítani.<br />
A transzpozíció irányultságát biztosító fúziós fehérje tehát a következő két esszenciális<br />
doménből állt:<br />
i.) DNS kötő domén: FljA represszor fehérje mely felelős a fliC operátor<br />
célszekvencia felismeréséért.<br />
ii.) A transzpozáz domén: IS30 transzpozáz fehérje, amely az integráció<br />
lejátszódásáért felelős.<br />
Maga a rendszer három funkcionális komponensből állt:<br />
1.) Célszekvencia: fliC operátor, amely megfelel az FljA represszor fehérje által<br />
felismerendő szekvenciának. Ez a szekvencia a fliC és fliD gének által határoltan<br />
helyezkedik el a Salmonella kromoszómán.<br />
2.) A fentebb ismertetett FljA-IS30 fúziós fehérje, amely egy e célból bejuttatott plazmid<br />
DNS-ről szintetizálódik és az integrációs donor szekvencia beépítését végzi a<br />
célszekvenciába.<br />
3.) Integrációs donor szekvencia, amely a transzpozáz aktív helyét (az (IS30)2 struktúra)<br />
egy marker génnel (Cm R ) kapcsoltan tartalmazza, s egy második, „donor” plazmidon<br />
helyezkedik el (lásd később az 5. ábrán). Ez a plazmid integrálódik a célszekvenciába.<br />
Célok<br />
A fenti mutagenezis rendszerrel végzett kísérleti munka célja egy megfelelő negatív fehérje<br />
markerrel ellátott Salmonella Enteritidis mutáns előállítása volt, amely a munka későbbi<br />
fázisában egy élő, orális baromfi vakcina alapjául szolgálhat. A mutagenezis célpontját a H<br />
antigén termelődésért felelős flagellin gének – elsősorban a fliC operátor és környezete –<br />
jelentik A feladatot egy új megközelítéssel – irányított transzpozícióval – terveztük<br />
végrehajtani.<br />
34