A PCR-hez szükséges reagensek a MBI Fermentas-tól, a primerek a gödöllői Mezőgazdasági Biotechnológiai Központ szolgáltató laboratóriumából (ma: Biomi Kft.) származtak. A templát DNS a baktériumok egyéjszakás levestenyészetéből kiindulva fagyasztásos-forralásos módszer szerint készült. A reakció az alábbi program szerint zajlott: a kezdeti 94°C-os 3 perces denaturáció után 35- szörös ismétlésben a következő ciklus: 94°C-on 20 másodperc denaturáció, 55°C-on 30 másodperc primerkötődés, 72°C-on 90 másodperc szintézis. A 35. ciklus után egy 72 °C-os, 5 perces végső extenziós lépés következett. A PCR termékeket 1,5%-os TAE agaróz gélben futtattuk. A gélhez a kiöntés előtt a DNS láthatóvá tétele érdekében etídium-bromidot adtunk 0,5 µg/ml végkoncentrációban. Az elektroforézis horizontális gélrendszerben, egyszeres töménységű TAE pufferben történt, 90- 120 V feszültséggel. Az elektroforézist követően a géleket 302 nm hullámhosszú UV átvilágító asztalon digitális kamerával (Kodak Digital Science DC120) fényképeztük és a gélfotók archiválásához a Kodak Digital Science 1D programot alkalmaztuk. 24
I. Táblázat A vizsgált Salmonella törzsek és azok eredete Szerovariáns Törzs Eredet Minta S. Enteritidis SL/7293 Stocker (USA)* baromfi S. Enteritidis 3, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 OÉVI baromfi S. Enteritidis 10091, 10092 MNT emberi S. Enteritidis E 291, E 296, E 287/92, E 307/92, E 399/93 OEK baromfi S. Enteritidis E 516, E 519, E 521, E 239, E 519/93, E 579/93, E OEK 899/93, E 905/93, EI 3352 élelmiszer S. Enteritidis 44/94, 208/94, 220/94, 225/94, 226/94, 117/94, OEK emberi 280/94, S 7, S 33, S 42, S 12 S. Enteritidis 79, 80 PTE emberi S. Enteritidis 85, 86 Humphrey (UK) emberi S. Enteritidis 87, 88 Humphrey (UK) baromfi S. Enteritidis LA5, 105, 857 Naughton (UK) baromfi S. Enteritidis 90-13-206 Zijderveld (NL) baromfi S. Typhimurium 2, 8, 27, 2194, 2209 OÉVI baromfi S. Typhimurium 10040 MNT egér S. Typhimurium 10041, 15007 MNT emberi S. Typhimurium 421/101 Bábolna baromfi S. Typhimurium 98 Bábolna, vakcina törzs baromfi S. Hadar 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 Bábolna baromfi S. Hadar 40 OEK emberi S. Hadar 71, 72 OÉVI baromfi S. Gallinarum 220 ÁEGB baromfi S. Gallinarum 318 ÁEGD baromfi S. Gallinarum 319, 320, 321 OÉVI baromfi S. Abortusequi 10007, 10008 MNT ismeretlen E. coli TG1 (negatív kontroll) Gibson (UK) K-12 labor törzs Bábolna: Bábolna Rt., MNT: Orvosi Baktériumok Magyar Nemzeti Törzsgyűjteménye, OEK: Országos Epidemiológiai Központ, OÉVI: Országos Élelmiszervizsgáló Intézet, PTE: Pécsi Tudományegyetem, Orvosi Kar, Mirobiológiai és Immunológiai Intézet, ÁEGB: Állategészségügyi Intézet, Békéscsaba, ÁEGD: Állategészségügyi Intézet, Debrecen, *: A származási országot minden külföldi törzsnél jeleztük. 25
- Page 1 and 2: Szent István Egyetem Állatorvos-t
- Page 3 and 4: Tartalomjegyzék Rövidítések jeg
- Page 5 and 6: 5.2. Anyagok és módszerek 77 5.2.
- Page 7 and 8: Összefoglalás Munkánk elsődlege
- Page 9 and 10: Azokat a szalmonellákat, amelyek k
- Page 11 and 12: A S. Gallinarum-Pullorumtól eltér
- Page 13 and 14: Salmonella pathogenitási sziget 2
- Page 15 and 16: kitüremkedések jelennek meg és k
- Page 17 and 18: feltehetően a vezikulumokat mozgat
- Page 19 and 20: tapasztalatunk az egyes élő orál
- Page 21 and 22: 2. A flagellin rendszer és PCR-es
- Page 23: 2.2 Anyagok és módszerek 2.2.1. B
- Page 27 and 28: 2.3. Eredmények és megbeszélés
- Page 29 and 30: hixL Nincs inverzió P hin hixR flj
- Page 31 and 32: Amint a bevezetőben már említett
- Page 33 and 34: 3.1.2. Transzpozonokon alapuló mut
- Page 35 and 36: 3.2. Anyagok és módszerek 3.2.1.
- Page 37 and 38: Ligálás -2 µl (kb. 20-50 ng) vek
- Page 39 and 40: 7. Konjugációs lépés: összekev
- Page 41 and 42: leolvasási keretben a PstI hasít
- Page 43 and 44: S. Enteritidis 11 operátor fli C T
- Page 45 and 46: Elvégezve a kísérletet (8. ábra
- Page 47 and 48: 9. ábra A vad típusú (+) és a n
- Page 49 and 50: 3.3.5. Az FljA-IS30 fúziós transz
- Page 51 and 52: 3.4. Megbeszélés A mobilis geneti
- Page 53 and 54: teszttel vizsgálva lényegesen gye
- Page 55 and 56: Továbbra is nyitott maradt viszont
- Page 57 and 58: 11. ábra A S. Enteritidis virulenc
- Page 59 and 60: 4.2. Anyagok és módszerek 4.2.1.B
- Page 61 and 62: 4.2.6. Transzpozon alapú plazmid
- Page 63 and 64: 4.3. Eredmények 4.3.1. Előzetes e
- Page 65 and 66: komponens az ampicillin rezisztens
- Page 67 and 68: 13. ábra Az SE 612 Km R törzs azo
- Page 69 and 70: Az IS30 transzpozáz indukciója me
- Page 71 and 72: 15. ábra Különböző deléciós
- Page 73 and 74: Mindezek ellenére sajnos a klasszi
- Page 75 and 76:
meg segítségükkel: Tn5-sacB (Hyn
- Page 77 and 78:
követelmények között a hatékon
- Page 79 and 80:
4. Az inkubáció után a felülús
- Page 81 and 82:
XII. táblázat A real-time PCR-ek
- Page 83 and 84:
XIII. táblázat A védőhatás viz
- Page 85 and 86:
5.3. Eredmények 5.3.1. Az in vitro
- Page 87 and 88:
log10 CFU/ml 5 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,
- Page 89 and 90:
csökkentő munkáknak, azonban el
- Page 91 and 92:
Az állatkísérleti rendszer megeg
- Page 93 and 94:
pozitív minták 90,00% 80,00% 70,0
- Page 95 and 96:
% pozitivitás 120 100 80 60 40 20
- Page 97 and 98:
XVI. táblázat A korai védelmet v
- Page 99 and 100:
XVIII. táblázat A korai védelmet
- Page 101 and 102:
5.4. Megbeszélés Munkánk utolsó
- Page 103 and 104:
naposcsibéknek (CEVA), melyek felt
- Page 105 and 106:
Záró megbeszélés Mint az irodal
- Page 107 and 108:
kísérleti fertőzése kapcsán k
- Page 109 and 110:
Kísérleteink további célja volt
- Page 111 and 112:
Az előállított nem mozgó (SE210
- Page 113 and 114:
Barrow PA. The paratyphoid salmonel
- Page 115 and 116:
Desmidt M, Ducatelle R, Haesebrouck
- Page 117 and 118:
Hassan JO, Curtiss R 3rd. Developme
- Page 119 and 120:
Kingsley RA, Baumler AJ. Host adapt
- Page 121 and 122:
Nagy B, Kovács S, Milch H, Bitay Z
- Page 123 and 124:
Szmollény G, Tóth I, Rásky K, P
- Page 125 and 126:
Zhou D, Mooseker MS, Galan JE. Role
- Page 127 and 128:
3. Nógrády N., Imre A., Nagy B. (
- Page 129:
Köszönetnyilvánítás Őszintén