értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola

A PCR-hez szükséges reagensek a MBI Fermentas-tól, a primerek a gödöllői Mezőgazdasági
Biotechnológiai Központ szolgáltató laboratóriumából (ma: Biomi Kft.) származtak. A
templát DNS a baktériumok egyéjszakás levestenyészetéből kiindulva fagyasztásos-forralásos
módszer szerint készült.
A reakció az alábbi program szerint zajlott: a kezdeti 94°C-os 3 perces denaturáció után 35-
szörös ismétlésben a következő ciklus:
94°C-on 20 másodperc denaturáció,
55°C-on 30 másodperc primerkötődés,
72°C-on 90 másodperc szintézis.
A 35. ciklus után egy 72 °C-os, 5 perces végső extenziós lépés következett.
A PCR termékeket 1,5%-os TAE agaróz gélben futtattuk. A gélhez a kiöntés előtt a DNS
láthatóvá tétele érdekében etídium-bromidot adtunk 0,5 µg/ml végkoncentrációban. Az
elektroforézis horizontális gélrendszerben, egyszeres töménységű TAE pufferben történt, 90-
120 V feszültséggel. Az elektroforézist követően a géleket 302 nm hullámhosszú UV
átvilágító asztalon digitális kamerával (Kodak Digital Science DC120) fényképeztük és a
gélfotók archiválásához a Kodak Digital Science 1D programot alkalmaztuk.
24