értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
értekezés - Állatorvostudományi Doktori Iskola
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Konklúziók<br />
Munkánk során, amely molekuláris markerrel ellátott, élő, orális Salmonella Enteritidis<br />
vakcina jelölt törzsek molekuláris biológiai eszközökkel való előállítását célozta, a következő,<br />
nemzetközileg is új eredményeket értük el:<br />
PCR-es tesztelő rendszert terveztünk, amely alkalmasnak bizonyult Salmonella törzsek<br />
flagellin termelő génjeinek és a flagellin fázisváltó rendszer elemeinek vizsgálatára. E<br />
módszerrel megerősítettük, hogy a Salmonella Enteritidis törzsek flagellin fázisváltásra való<br />
képtelenségének oka, hogy azokból mindig hiányzik a H2 fázisért felelős fljB gén, a flagellin<br />
represszor fljA gén, valamint a teljes fázisváló rendszer (hin, hixL, hixR). Jelen van azonban a<br />
fliC és annak operátor szekvenciája, amelyek folyamatosan expresszálják a H1-es flagellint.<br />
Annak érdekében, hogy a vakcina jelölt törzseinket molekuláris markerrel lássuk el, irányított<br />
transzpozon-mutagenezis rendszert dolgoztunk ki a Salmonella flagellin génekre. Ennek során<br />
a flagellin represszor fljA gént fúzionáltattuk az IS30 transzpozáz génjével, majd az így<br />
létrejött IS30-FljA fúziós fehérje működését a Salmonella Enteritidis 11 jelű törzsünkben<br />
vizsgáltuk. Megállapítottuk, hogy a fúziós transzpozáz nagyobb gyakorisággal okoz<br />
mutációkat a fliC operátor célszekvencia környezetében, mint a vad típusú IS30 transzpozáz.<br />
A hagyományos módszerekkel nehezen kiűzhető, nagyméretű Salmonella virulencia plazmid<br />
kiűzésére új, transzpozon alapú eljárást dolgoztunk ki. A módszer lényege, hogy az IS30<br />
transzpozáz jelenlétében igen aktív, összekapcsolódott IS30 IR végeket a kiűzni kívánt<br />
plazmidra juttatjuk, amely aztán az IS30 transzpozáz hatására olyan genetikai átrendeződések<br />
kiindulópontjává válik, amelyek igen nagy gyakorisággal vezetnek a replikon<br />
eliminációjához. A módszer Salmonella Enteritidisben 50% feletti virulencia plazmid űzési<br />
gyakorisággal működött. A leírt módszer előnye, hogy jó hatékonysága mellett deléciós<br />
plazmid változatok generálására (így deléciós térképezésre) is alkalmas lehet, továbbá – mint<br />
egyébütt közöltük - más baktériumfajokban (Escherichia coliban) is működik.<br />
110
Change language