Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...

More documents

Recommendations

Info

Mindemellett, voltak olyan esetek, ahol ugyanarról a teleprıl származó, de eltérı életkorú csirkékbıl mutattunk ki különbözı genotípusokat annak ellenére, hogy az állatok azonos keltetıbıl származtak. Az ANV olyan magas mutációs rátával rendelkezik, hogy még a molekuláris biológiai vizsgálatok alkalmazása sem minden esetben elegendı a baromfiállományt sújtó ANV fertızés eredetének kiderítésére. Ezért nem lehetünk teljesen bizonyosak abban, hogy az általunk negatívnak talált esetekben valóban nem volt jelen az ANV. Ezt csak az valószínősíti, hogy a különbözı régiókra tervezett primerek egyikével sem kaptunk pozitív eredményt ezekben az esetekben. A következtetett aminosav sorrend adatok vizsgálata azt sugallja, hogy sok a néma mutáció és az esetleg különbözı genotípushoz tartozó törzsek fenotípusuk alapján nem mutatnak eltérést (pl.: Imr2/03, Sze1/04, Zal1/05). Másrészrıl olyan minták között is találtunk aminosav sorrendbeli különbséget, amelyeket ugyanarról a teleprıl, ugyanabban az idıpontban győjtöttünk (pl.: Sza1/05 és Sza2/05, vagy Imr1/03 és Imr2/03; 21. ábra). A nagyfokú változékonyság esetleg befolyásolhatja a PCR alapú kimutatási módszerek használhatóságát abban az esetben, ha a primerek tapadási helyén alakul ki mutáció. Azonban ennek ellenére a diagnosztikai munkában a PCR alkalmazása tőnik megfelelınek a hagyományos virológiai kimutatási módszerekkel szemben, hiszen a vírus szövettenyészeten csak nehezen és körülményesen izolálható speciális sejtvonal igénye, lassú szaporodása és elenyészı citopatogén hatása miatt (Frazier és mtsai, 1990). A mutációk során kialakuló fehérjeszerkezeti változások megváltoztathatják a vírustörzsek patogenitását és antigenitását. Fertızéses állatkísérletekben és klinikai esetek megfigyelése során azt tapasztalták, hogy az ANV patogenitása függ a tartási tényezıktıl, a felhasználási típustól (tojó hibrid vagy brojler csirke), a tenyészetett baromfivonaltól, de az állatok nemétıl és korától is (Frazier és mtsai, 1990; Imada és mtsai, 1981; Imada és mtsai, 1983). Az említett tényezık mellett a törzsek virulenciájának eltérései is befolyásolhatják a kialakuló kórkép, vagyis a vesegyulladás súlyosságát. Shirai és munkatársai (1991b és 1992) leírták, hogy a napos csirkék köszvényében elpusztult állatokból izolált AN vírustörzsek állatkísérletekben fertızı anyagként felhasználva eltérı mortalitást okoztak, és a kórbonctani elváltozások megjelenési formája is különbözött. Az általunk vizsgált törzsek szekvenciaelemzése alapján hasonló patogenitásbeli különbségek Magyarországon is valószínőek. További vizsgálatokkal lehet majd tisztázni a kialakuló nephritis és a vírus genetikai jellemzıi közötti oki összefüggést, a törzsek közötti genetikai diverzitás hatását, vagy akár a fertızı és nem fertızı eredető hajlamosító tényezıknek a klinikai és kórbonctani elváltozások súlyosságára gyakorolt befolyását. 64
A mutációk a patogenitáson kívül a vírus antigenitására is hatással vannak. Jelenleg két avian nephritis vírushoz tartozó elkülönülı szerotípust különböztetnek meg (Shirai és munkatársai, 1991b és 1992). Sajnos az ANV kettes szerotípusának csak részleges, az ORF2 régióról származó szekvenciája (AB046864) található meg a génbankban. Mivel ez a szakasz a vírus strukturális poliproteinjét, vagyis kapszid fehérjéket kódoló régióját képviseli, az általunk filogenetikai analízisre felhasznált, ORF1 nem strukturális fehérjérıl származó magyarországi törzseket nem tudtuk összehasonlítani a 2-es típusú AN vírussal. Az antigenitásbeli különbségekre azonban figyelemmel kell lenni egy esetleges fertızı vesegyulladás elleni vakcina kifejlesztése során. Az elsı vizsgálatok során az ORF1-en nested PCR-rel kapott 92%-os homológia a referencia törzzsel szintén alacsony, ezért gondoltuk, hogy az ORF1 további régióinak filogenetikai elemzése is érdekes eredményre vezethet. A nagyfokú változékonyság, amit tapasztaltunk, kétségessé tette, hogy az ORF2-n lehetséges általánosan vagy széles körben tapadó pimerpárt tervezni, hiszen a vírus strukturális fehérjéket kódoló genomszakaszán jóval magasabb mutáció várható. További vizsgálatok elvégzését tervezzük az általunk mostanáig elemzett vírustörzsek ORF2 régióján amplifikált termékkel. Így megvizsgálhatjuk a strukturális fehérjék törzsfa elemzése mellett, hogy a magyarországi vírustörzsek a génbankban található ANV 1-es vagy esetleg a 2-es típusával mutatnak nagyobb hasonlóságot. Vizsgálataink során természetes esetekbıl származó, nagy eltérést mutató vírustörzsek összehasonlítását végeztük el. Ez alapján kimondhatjuk, hogy az általunk tervezett RT-PCR módszer nagyszámú, köszvényben elpusztult vagy vírusos vékonybél- és vesegyulladás képét mutató állat szervmintájából magas arányban volt alkalmas eltérı vírustörzsek kimutatására és összehasonlítások elvégzésére. A PCR teszt a késıbbiekben is használható lesz további minták vizsgálatára, és elemzésére. Az ANV különbözı, akár környezı országokból származó újabb genotípusainak átfogó filogenetikai vizsgálata tisztázhatja majd a vírus pontos kóroktani szerepét a csirkék fertızı vesegyulladás kórképének, és a következményes veseelégtelenség kártételének kialakulásában. 7.3.3. Az elváltozások szöveti megoszlása és ennek jelentısége Feldolgozott eseteinkben az egy hetesnél fiatalabb állatokban a vékonybél gyakran mutatott erıs pozitivitást az ANV vírus nukleinsav jelenlétére, míg ugyanazon állatok vesemintáiból nem sikerült vírusnukleinsavat kimutatnunk. Vizsgálatainkkal alá tudtuk támasztani az irodalomban is közölt feltételezett patogenezist, vagyis azt, hogy a fertızés 65
Page 1 and 2:
Szent István Egyetem Állatorvos-t
Page 3 and 4:
TARTALOMJEGYZÉK 1. RÖVIDÍTÉSEK
Page 5 and 6:
1. RÖVIDÍTÉSEK AN(V) - Avian Nep
Page 7 and 8:
szintetizáltattunk a vírus ORF1 r
Page 9 and 10:
kapcsolatban érzékenyebbek, hisze
Page 11 and 12:
laboratóriumi hátteret és viszon
Page 13 and 14: 4. IRODALMI ÁTTEKINTÉS A napos ko
Page 15 and 16: kloákából ürített bélsárban
Page 17 and 18: A görög eredető „astron = csil
Page 19 and 20: hogy a macska (FAstV) és a sertés
Page 21 and 22: A szövettenyésztés az astrovíru
Page 23 and 24: Az utóbbi években sikerült megis
Page 25 and 26: 4.6. Az avian nephritis vírus Az a
Page 27 and 28: Az állatok szájon keresztül vesz
Page 29 and 30: Mivel a DNS-fragmentum mennyisége
Page 31 and 32: 5.1. Vizsgálati minták 5. ANYAG
Page 33 and 34: 5.4. Bakteriológiai vizsgálat A h
Page 35 and 36: tervezéső, ugyancsak diagnosztika
Page 37 and 38: 0,8µM-t, továbbá 2µl amplifiká
Page 39 and 40: alacsony dózisú (rövid idejő) 3
Page 41 and 42: 6. táblázat: Egy imrehegyi telepr
Page 43 and 44: 11. ábra: A vírusos vesegyulladá
Page 45 and 46: 6.3. A boncolási eredmények össz
Page 47 and 48: 6.6. RT-PCR vizsgálatok Az ANV spe
Page 49 and 50: 6.6.2. A nested PCR vizsgálat Az e
Page 51 and 52: 6.6.3. Az 1991-bıl származók min
Page 53 and 54: 6.6.5. A fertızı bronchitis víru
Page 55 and 56: 8. táblázat: Az IBV fertızés vi
Page 57 and 58: közötti hasonlóságot mutattak e
Page 59 and 60: 21. ábra: Az avian nephritis víru
Page 61 and 62: 7.2. A fertızı bronchitis vírus
Page 63: (Mándoki és mtsai, 2006b). A kido
Page 67 and 68: való azonosítása (Mézes és Kı
Page 69 and 70: 9. IRODALOM BALLAGI-PORDÁNY, A., B
Page 71 and 72: HELMBOLDT, C.F., GARNER, E.: Experi
Page 73 and 74: LUKASHOV, V.V., GOUDSMIT, J.: Evolu
Page 75 and 76: SCHULTZ-CHERRY, S., KING, D.J., KOC
Page 77 and 78: 10. A JELÖLT TUDOMÁNYOS PUBLIKÁC
Page 79 and 80: a sailfin lizard’s (Hydrosaurus a
Page 81 and 82: 11. KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS Szeret
Page 83: To shorten the time necessary for t
show all

Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?