Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...
Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...
Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
(<strong>Mándoki</strong> és mtsai, 2006b). A kidolgozott módszer megfelelı diagnosztikai felmérı és szőrı<br />
vizsgálatok végzésére, sıt eltérı törzsek filogenetikai elemzését is lehetıvé teszi (<strong>Mándoki</strong> és<br />
mtsai, 2006a). A többszörös ellenırzés bizonyította, hogy téves pozitív eredményt nem<br />
kaptunk. A PCR teszt eredményeként kapott megfelelı molekulatömegő termékek a<br />
szekvenálás során minden esetben az ANV szekvenciájával mutatták a legnagyobb<br />
hasonlóságot.<br />
Az ORF2 régióra tervezett primerpárok közül elıször egyikkel sem kaptunk terméket,<br />
ami felvette annak a lehetıségét, hogy a vírus strukturális fehérjéket kódoló régióján még<br />
nagyobb a különbözı törzsek közötti szekvencia eltérés, mint az ORF1-en, illetve arra utal,<br />
hogy esetleg az általunk tervezett primerpárok tapadási helyén van mutáció. Mivel a<br />
génbankban csak egy teljes genomszekvencia szerepel, nem volt lehetıségünk több ANV<br />
szekvencia felhasználásával továbblépni. Az ORF2-re tervezett primerek különbözı<br />
párosítása után egy primerpárral (4. táblázat) sikerült mégis megfelelı molekulatömegő<br />
terméket kapnunk. Az ORF2 régióra tervezett primerekkel jelenleg folyik a pozitív esetek<br />
szőrıvizsgálata, hogy az egyes vírustörzsek rokonságát a strukturális fehérjék<br />
vonatkozásában is vizsgálhassuk. Egyelıre korlátozott számú szekvenciaadat áll<br />
rendelkezésünkre, de az identitási értékek nagyjából azonosak a nem strukturális fehérjék<br />
régióján kapott értékekkel (NS: 79-80%; AS: 88-91%). A vírustörzsek nagyfokú szekvencia<br />
eltérései ellenére a genom mindkét régiójára sikerült eddigi vizsgálataink szerint<br />
univerzálisan mőködı primerpárt tervezni. További cél a vírus izolálása, és így - lehetıség<br />
szerint - a teljes genom megismerése.<br />
7.3.2. Filogenetikai vizsgálatok<br />
Az avian nephritis vírus ORF1 genomrégiójának a vizsgált szakasz szekvenálását<br />
követı filogenetikai elemzése a magyarországi genotípusok rendkívüli változékonyságát<br />
mutatta annak ellenére, hogy az ellenanyagok által szelekciós nyomásnak nem kitett, a<br />
strukturális proteint kódoló génszakasz összehasonlító vizsgálatát végeztük el. A<br />
Magyarországon 2002 és 2005 között győjtött vírustörzsek genetikai távolsága hasonló volt<br />
egymástól, mint a 30 évvel ezelıtt izolált japán referencia törzstıl. Noha a magyarországi és<br />
japán baromfiállományok földrajzilag teljesen elkülönültek egymástól, az egymástól sokszor<br />
kis távolságra lévı magyarországi telepekrıl származó izolátumok közötti eltérés körülbelül<br />
azonos mértékő volt, mint a magyar és a japán törzsek közötti különbség. Ez azért is<br />
meglepı, mert más vírusok esetében a viszonylag konzervatív nem strukturális fehérjét<br />
kódoló régión nem szokott ilyen magas lenni a mutációs hajlam.<br />
63
Change language