Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...

nested PCR reakció esetében már a külsı primerpár alkalmazásánál is a várt erısségő és
molekulatömegő terméket kaptuk. A rendszer megfelelı érzékenységő volt, ezért a belsı
primerpárt a továbbiakban nem alkalmaztuk. Mivel a reakció beállítása során más állatfaj
coronavírusával is pozitív eredményt kaptunk, a továbbiakban a szőrıvizsgálatok során a
saját tervezéső diagnosztikai primerpárt, az „avian corona f és r” primereket használtuk (5.
táblázat), melyeknél a termék várt mérete 139bp (18. ábra). Külön kiemelendı az 1991-bıl
származó másik minta retrospektív vizsgálatának eredménye: az 1. zseb az „721-BI/91”
thymus, a 8. zseb a „721-BI/91” vese mintából kapott PCR terméket mutatja, mindkettı
pozitívnak bizonyult az IBV nukleinsav jelenlétére.
Egyetlen esetben sem mutattuk ki ANV nukleinsav jelenlétét a fertızı bronchitis vírus
elleni immunizálásra használt, kereskedelmi forgalomban lévı vakcinákból a négy
leggyakrabban használt vakcinatípus PCR vizsgálata során.
A 19. ábrán látható gélfotó 9-12. oszlopára mértük be az IBV elleni vakcinákból
származó mintákat és mindegyik negatívnak bizonyult ANV jelenlétére.
19. ábra: Az IBV vakcinák esetleges ANV kontaminációjának kizárása RT-PCR
reakcióval.
(1.-13. zseb: 100bp DNS létra; 2-22. zseb: minták; 23. zseb: pozitív kontroll; 24. zseb:
negatív kontroll. A 2., 3., 6., 16., 20. zseb mutatja a megfelelı, 607bp hosszúságú ANV
termék jelenlétét, és ezáltal pozitívnak minısítettük, a fennmaradó zsebekben nem látható
termék, ezek a minták negatívak ANV nukleinsav jelenlétére.)
54