Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...

6.6.2. A nested PCR vizsgálat
Az elsı jellegzetes kórbonctani elváltozásokat mutató 5 csirkehulla vesemintáin
végeztük el a reakciót (15. ábra). A génbankban letétbe helyezett ANV genomszekvencia
alapján tervezett primerpárok a vírus jelenlétének kimutatására alkalmasnak bizonyultak. A
várt molekulatömegő termékek a vizualizáció során tiszta és határozott csíkként jelentek meg.
A negatív kontrollok esetében az amplifikáció nem eredményezett terméket.
A PCR reakció optimalizálása után, megpróbáltuk a nested reakció primer párjait külön
is használni. Mindkét primer pár értékelhetı csíkot adott, ezért a továbbiakban az esetleges
kontamináció veszélyének csökkentése érdekében a külsı primer párral végeztünk el a PCR
reakciót, és a termék nukleotid sorrendjét meghatároztattuk.
15. ábra: A 324bp hosszú termék, amely a nested PCR reakcióval vizsgált 5 csirkehulla
veseszövet mintái közül egyben a vírus jelenlétére utal
49