Mándoki - Állatorvostudományi Doktori Iskola - Szent István ...

DNS denaturálása, 93-95°C-on ugyanis a DNS két szála elválik egymástól. A második
reakció (primerkapcsolódás) általában 45-60°C-on játszódik le, ekkor a reakcióelegyben lévı
oligonukleotid primerek odakötıdnek a megsokszorozandó, egyszálú formában jelen lévı
DNS két specifikus szakaszához (Gibbs, 1990). A PCR reakció egyébként 68°C kapcsolódási
hımérsékletig zavartalanul mőködik. Az oligonukleotidok 20-30 bázispárból álló, szimpla
szálú DNS-darabkák, melyek bázissorrendje komplementer a megsokszorozandó DNS-
szakasz végén lévı bázissorrenddel. A primerkapcsolódás a PCR egyik legkritikusabb pontja,
mert a reakció specifikusságát alapvetıen befolyásolja. Ha alacsony tapadási hımérsékletet
alkalmazunk, a primerek akár egy nem-specifikus DNS szakaszhoz is képesek kapcsolódni,
vagyis olyanhoz amelynek homológiája nem teljes és így képesek hibás pozitív eredményt
adni. A harmadik reakció (láncszintézis) során, 72°C-on, a jelenlévı DNS-polimeráz enzim
lemásolja a két primer közötti DNS-szakaszt (templát), azaz új DNS-szálat szintetizál. A
következı ciklusokban ugyanezek a reakciólépések ismétlıdnek meg, de most már mindig
kétszer annyi lemásolható DNS-molekula van jelen, mint az elsı ciklusban (8. ábra).
8. ábra: A PCR reakció sematikus ábrázolása (Stansfield, 1997)
28