A hasüreg fertőzéseinek klinikai mikrobiológiája
A hasüreg fertőzéseinek klinikai mikrobiológiája
A hasüreg fertőzéseinek klinikai mikrobiológiája
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
A <strong>hasüreg</strong> <strong>fertőzéseinek</strong><br />
<strong>klinikai</strong> <strong>mikrobiológiája</strong><br />
Dr. Urbán Edit<br />
SZTE ÁOK Klinikai Mikrobiológiai<br />
Diagnosztikai Intézet<br />
Szeged<br />
A fertőzés fogalma<br />
A fertőzés mikroorganizmusok<br />
megtelepedését és szaporodását<br />
jelenti a szervezetben, mely a<br />
szervezet védekezési reakcióit váltja<br />
ki és ezáltal károsítja a<br />
mikroorganizmust<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
1
A sebészeti fertőzés<br />
Elkülönítése más fertőzésektől:<br />
gyakorlati és<br />
elméleti alapon<br />
Körülhatárolt góc, mely sebészeti<br />
beavatkozást tesz szükségessé<br />
Kontakt infekció<br />
Aerogén<br />
Haematogén<br />
Endogén:a fertőzés forrása a beteg<br />
Exogén:a beteg környezete<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Elősegítő tényezők<br />
Helyi tényezők<br />
Kültakaró sérülése: trauma, műtét<br />
Vérellátási zavar: érszűkület, sebészi lekötés<br />
Nem kielégítő sebellátás: haematoma<br />
Idegentest implantációja: Véna-, hólyag katéter<br />
Általános tényezők<br />
Életkor<br />
Kísérőbetegségek: DM, anaemia, cirrhosis,<br />
malignomák, alkoholizmus<br />
Terápiás beavatkozás: szteroidok, sugárterápia,<br />
cytostatikumok<br />
Adipositas<br />
Cachexia<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
2
A fertőzés terjedése<br />
A sebészi fertőzés általában egy, jól<br />
körülhatárolt gócból indul ki<br />
Fenyegetővé válik, ha tovaterjed, a toxinok<br />
elárasztják a szervezetet<br />
A terjedés mechanizmusa:<br />
Anatómiailag adott rétegek mentén terjed (phlegmonae,<br />
clostridiumok okozta myonecrosisok)<br />
A tályog áttöri a membránt<br />
Terjedés a nyirokutak, ill.<br />
A véráram útján (sepsis)<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Szövődmények<br />
Sipoly<br />
Különösen <strong>hasüreg</strong>i abscessus esetén<br />
Elhúzódó sebgyógyulás<br />
Oka maga a fertőzés<br />
Teendő: a góc szanálása<br />
Immunszuppresszio és szuperinfekció<br />
Kórokozó gyakran multi-, ill. pánrezisztens<br />
baktérium<br />
Sepsis<br />
SIRS (systematic inflammatory response syndrome)<br />
MODS (multiple organ dysfunction syndrome)<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
3
Az intraabdominális infekciók<br />
súlyossága, megjelenési formái<br />
Eltérő lehet, de gyakori előfordulásuk, magas<br />
letalitásuk miatt ma is a legproblémásabb<br />
sebészeti infekciók<br />
A sebészi technika javulása, a széles<br />
spektrumú antibiotikumok használata, az<br />
intenzív terápiás módszerek fejlődése a közel<br />
90%-os letalitást az 1990-es évek végére<br />
20%-ra csökkentette*<br />
Etiológiai felosztásuk igen szerteágazó<br />
* Wittman DH, Intra-abdominal infections. Pathophysiology& treatment.<br />
Marcel Dekker Inc. NY, Basel, Hong Kong. 1991.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Az intraabdominális infekciók<br />
súlyossága, megjelenési formái<br />
A hasűri infekciók túlnyomó többségét a<br />
szabad <strong>hasüreg</strong> bakteriális, gombás jellegű<br />
fertőzései jelentik, melyek mind a viscerális,<br />
mind a parietális peritoneumot érinthetik<br />
A peritonitisnél a hashártya körülírt gyulladása,<br />
Az intraabdominális tályognál egy letokolt, a<br />
szabad <strong>hasüreg</strong>től többé-kevésbé elhatárolt<br />
gennygyülem van, mely a lokális peritonitis<br />
különleges formájának tekinthető<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
4
A gastrointestinális traktus<br />
normál flórája<br />
Az intraabdominális infekciók kórokozói a<br />
normál bélflórából származnak, így fontos<br />
ismernünk a gastrointestinális traktus<br />
különböző részein normál körülmények<br />
között meglévő flóra pontos összetételét.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
A gastrointestinális traktus<br />
normál baktérium flórája<br />
baktériumok<br />
csíraszám aerob/anaerob<br />
Gyomor 102-104 /ml ? Orális flóra<br />
Vékonybél 106-7 /ml ? Enterococcus<br />
Lactobacillus<br />
Corynebacterium<br />
Enterobacteriaceae<br />
Bacteroides<br />
Vastagbél 1012-14 /ml 1:1000- Enterobacteriaceae Bacteroides<br />
1:10 000 Enterococcus Prevotella<br />
Kb.4-500 spec*<br />
(Pseudomonas) Porphyrom.<br />
Clostridium<br />
Fusobact.<br />
Eubacterium<br />
Bifidobact.<br />
Peptostrept.<br />
Bilophila<br />
* Moore et al. Anaerobic bacteria of gastrointestinal flora and their occurence in clinical infections, J.Inf.Dis. 1969.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
5
Az intraabdominális fertőzések<br />
kórokozói<br />
Főleg a gastrointestinális traktus normál flórájának<br />
tagjai közül kerülnek ki, azonban csak néhány patogén<br />
species szelektálódik ki és jut migratio révén a<br />
peritoneális űrbe<br />
Csak a természetes előfordulási helyükön életképesek<br />
Az egyes baktérium speciesek pathogenitásának<br />
mértéke kifejezhető az infekcióban ill. a bélflórában való<br />
előfordulásuk gyakoriságának arányával<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Az intraabdominális fertőzések<br />
kórokozói<br />
Patogén baktériumok szinergizmusa Állatkísérletek*<br />
Vegyes széklet flóra+bárium szulfát intraperitoneálisan oltott<br />
állatok:<br />
Akut peritonitis<br />
Korai letalitás: Gram-negatív aerobok<br />
Késői komplikációk: anaerobok (tokos Bacteroides, Fusobacterium)<br />
E. coli-val oltott állatok:<br />
Csak a septicus, peritonitises fázis, hasonló halálozással, mint a<br />
vegyes flóra esetén<br />
De: a tályogképződés elmarad<br />
Nem tokos B. fragilis, v. Fusobacterium törzs:<br />
Megbetegedés –<br />
Tályogképződés –<br />
Hasonló az Enterococcus faecalis nagy csíraszám esetén<br />
* Oderdonk et al: Microbial synergy in extra-perimental intraabdominal abscess<br />
Infect Immun 1979. 22.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
6
Az intraabdominális fertőzések<br />
kórokozói<br />
E. coli+Bacteroides sp.:<br />
Szeptikus, peritonitises fázis+tályogképződés<br />
E. faecalis+Bacteroides sp.<br />
Szeptikus, peritonitises fázis<br />
Az intraabdominális infekció klaszikus képe: szeptikus<br />
fázis+tályogképződés<br />
E. coli izolált endotoxinja+Bacteroides tokanyaga*<br />
Hasonló a helyzet <strong>klinikai</strong> esetekben: ha a terápia csak az<br />
aerob Gram-negatívok ellen<br />
*Kasper, Oderdonk et al: Surface antigens as virulence factors in infections with B. fragilis<br />
Rev Inf Dis 1979. 78.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Peritonitis<br />
Pimer (spontán v. idiopathiás): nem tisztázható az<br />
infekció elsődleges helye<br />
Felnőttek: alkoholos, cirrhozisos<br />
Haematogén út, kórokozók*:<br />
E. coli (35%) Anaerobok ritkán* *!!<br />
S. pneumoniae (15%)<br />
Staphylococcus-ok<br />
Enterococcus<br />
Pseudomonas<br />
Enterobacter<br />
Klebsiella<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
•* Golden et al.: Primary peritonitis in adults.<br />
South Med J 1975. 413.<br />
•* *Wilcox et al.:Spontaneus bacterial<br />
peritonitis: A review of pathogenesis,<br />
diagnosis & treatment Medicine 1987. 447.<br />
Gyermekek: régen: S. pneumoniae, alfán haemolizáló Str.<br />
Gram-negatív bélbaktériumok<br />
Staphylococcus-ok (főleg nephrosis syndromában)<br />
7
Peritonitis<br />
Primer peritonitis: Ritkán:<br />
Mycobacterium tuberculosis: haematogén<br />
szóródás útján, távoli nem felismert gócból<br />
Nőknél haematogén terjedés útján, vagy<br />
közvetlenül a petevezeték útján jutnak a<br />
<strong>hasüreg</strong>be és okozhatnak peritonitist:<br />
Neisseria gonorrhoeae<br />
Chlamydia trachomatis<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Peritonitis<br />
A szekunder peritonitisek oka az üreges hasi szervek<br />
„spontán” (gyulladásos, tumor, ischemia), ill. traumás<br />
perforációja, vagy postoperatív peritonitis (iatrogén sérülés,<br />
varratelégtelenség, stb…), mely során a hasűri szervek<br />
normál flóráját alkotó baktériumok, gombák váltják ki a<br />
hashártya súlyos gyulladását<br />
Típusos polimikróbás infekció, ahol számos aerob/anaerob<br />
baktérium együttes jelenlétével kell számolni<br />
E. coli Bacteroides fragilis, Bacteroides sp.<br />
Enterococcus Prevotella, Porphyromonas<br />
Enterobacter sp. Clostridium, Peptostreptococcus<br />
Kialakítását segíti minden hasűrbe került idegen anyag:epe,<br />
vér, faeces, necrotikus szövet<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
8
A CAPD kapcsán kialakuló peritonitis<br />
A CAPD (continous ambulatory peritoneal dyalisis) kapcsán<br />
kialakuló peritonitis során általában csak egyféle baktérium<br />
izolálható<br />
A fertőzést a katéter kontaminációja indíthatja el<br />
St. epidermidis<br />
corynebacteriumok<br />
A beteg S. aureus orrhordozó<br />
Bőrflóra változás után:<br />
Gram negatív bélbaktériumok: E. coli, Klebsiella, Enterobacter,<br />
Pseudomonas<br />
Anaerob baktériumok nem, vagy csak ritkán<br />
Ritkán:<br />
gombák, Candida parapsilosis, Aspergillus fumigatus, Fusarium<br />
Nocardia asteroides<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Peritonitis<br />
Tercier peritonitisnél a szervezet védekező<br />
mechanizmusainak elégtelensége miatt diffúz peritonitis<br />
keletkezik<br />
Sepsis <strong>klinikai</strong> képe figyelhető meg anélkül, hogy az infekció<br />
helye felderíthető lenne<br />
Sokszor alacsony patogentású, antibiotikum terápia miatt<br />
szelektált nozokómiális baktérium:<br />
Multirezisztens CNS<br />
Pseudomonas<br />
gomba<br />
A célzott antibiotikum terápia sikertelensége az<br />
általános védekező mechanizmus súlyos defektusa<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
9
Intaperitoneális tályogok<br />
Peritonitis tályogképződés<br />
Valamely hasi szerv spontán perforációja, ill. műtéti<br />
beavatkozást követően<br />
Elhelyezkedése: általában a primer elváltozás helyét jelzi<br />
Tályogképződés: appendicitis, diverticulitis, pancreatitis,<br />
pancreas tumor, epeelváltozások, actinomycosis, perforált<br />
tumor, trauma, pepticus fekély, gyulladásos bélelváltozás, húgyivar<br />
szervek elváltozásai, gyomor-vastagbélműtétek,<br />
epeműtéteket követő infekciók<br />
Mindig polimikróbás: aerob/anaerob komplex flóra<br />
E. coli Bacteroides fragilis, Bacteroides sp.<br />
Enterococcus Prevotella, Porphyromonas, Fusobacterium<br />
Enterobacter sp. Clostridium, Peptostreptococcus<br />
St. aureus Actinomyces, Propionibacterium<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Viscerális tályogok<br />
Pancreas tályogok: acut pancreatitis komplikációiként, ill.<br />
pancreas pseudocysta másodlagos fertőződéseként<br />
Ritkán monobakteriális: S. aureus, haematogén szóródás<br />
Gyakoriak vegyes, enterális flórát tartalmazó polimikrobiális<br />
tályogoka<br />
A kontaminált epe refluxa révén<br />
E. coli<br />
Enterobacterek<br />
Enterococcusok<br />
Alfán haemolizáló streptococcusok<br />
Vegyes anaerob flóra<br />
Gombák!!!<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
10
Léptályogok haematogén<br />
szóródás útján létrejövő<br />
St. aureus<br />
Viscerális tályogok<br />
Streptococcus speciesek<br />
Mikrotályogok, bakteriális<br />
endocarditis kísérőjeként<br />
25%-ban polimikróbás,<br />
anaerobok (Bacteroides)<br />
Szisztémás gombainfekció<br />
részeként candidák okozta<br />
léptályog: corticosteroid, v.<br />
tumorterápia<br />
Súlyos salmonellózis esetén:<br />
Salmonella sp.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Retroperitoneális tályogok:<br />
különböző vesefolyamatokban<br />
kialakuló vese körüli tályogok<br />
E. coli<br />
Proteus<br />
Enterobacter<br />
Appendicitis<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Enterococcus<br />
Anaerobok<br />
A gerincre lokalizálódó<br />
osteomyelitisek a<br />
retroperitoneális térbe történő<br />
betörése:<br />
S. aureus<br />
Ritka: M. tbc okozta<br />
A minták vételi technikájának, transzportjának javulása, mikrobiológiai<br />
ismeretek bővülése, új baktériumok<br />
Gangrénás és perforált appendicitisekben átlag: 12,2<br />
mikroorganizmus/minta<br />
A baktériumok nem árasztják el az appendix falát míg a nyálkahártya<br />
barrier nem károsodik súlyosan, az egyre progresszívebb ischémia<br />
következtében<br />
Baron és mtsai: (Clin Inf Dis 1992. 227.)<br />
patológiailag igazolt akut app. beteg appendix falából:2,3 bakt/minta, (0,6 aerob/1,7<br />
anaerob)<br />
gangrénás v. perforált appendicites beteg appendix falából: 9,9 bakt/minta (2,6<br />
aerob/7,3 anaerob)<br />
Érdekesség: csak ritkán sikerül izolálni kórokozót a gangrénás v.<br />
perforált appendicites betegek hasűri folyadékaiból<br />
11
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
A pancreatitis fertőzéses<br />
szövődményei<br />
Régi elv: az akut pancreatitis infekció következménye<br />
Ma: nem a baktériumok az akut pancreatitis etiológiai<br />
ágensei (epekövesség/alkoholizmus)<br />
Fertőződött necrosis<br />
Fertőződött pancreas pseudocysta<br />
Pancreas tályog<br />
A bélflóra haematogén, v. lymphogén úton, a fertőzött<br />
epe refluxa révén, vagy közvetlen transmurális<br />
translokáció következtében éri el a pancreast<br />
Csak a műtét alatt vett szövetminta v. folyadékgyülem<br />
a releváns!!<br />
Drainek: colonizáló ágensek<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
12
A pancreatitis fertőzéses<br />
szövődményei<br />
Bittner és mtsai: Dig Dis Sci 1987. 1082.<br />
Necrotikus pancreas szövetek fertőződése 76,8%-ban<br />
monobakteriális<br />
64%-ban Gram-negatív baktériumok<br />
Anaerobok: 8%-ban<br />
Candidák: 5 %-ban<br />
Pancreas tályogok: 56,2%-a monomikróbás<br />
Gram-negatív baktériumok dominanciája<br />
Anaerobok nem<br />
Candidák: 12,4% %-ban<br />
Beger és mtsai: Gastroenterol 1986. 433.<br />
Necrotikus pancreas szövetek felülfertőzéseiből vett necrotikus<br />
szövetminták:<br />
E. coli 54% Bacteroides 12%<br />
E. aerogenes 35% Candida 7%<br />
P. aeruginosa 12%<br />
Proteus 12%<br />
Enterococcus 15%<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Diverculitis<br />
A vastagbélben található diverticulumok mintegy 15-30%ban<br />
fertőződhetnek<br />
A diverticulum lumene a nagy nyomás következtében<br />
viszonylag megnövekszik a vastagbéllel kommunikáló<br />
csatornáéhoz képest, a béltartalom bejut a diverticulum<br />
belsejébe, onnan nem áramlik vissza<br />
A széklettartalom megrekedése miatt a vastagbél normál<br />
flórájának valamennyi aerob/anaerob speciese eláraszthatja<br />
a bélnyárkahártyát, a környező szöveteket<br />
gyulladás<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
13
Perforált peptikus fekélyek<br />
Perforált peptikus gyomorfekélyek mintegy fele<br />
bakteriológiailag pozitív perforált<br />
vastagbélfekélyek 100%-a<br />
Perforált vastagbélfekélyek: kevert aerob/anaerob<br />
flóra<br />
Hyperacid betegek gyomrában, duodenumában<br />
kevés a baktériumszám<br />
Aerob baktériumok, streptococcusok<br />
Gombák<br />
Intraabdominális candidiasis jelentős mortalitási ráta<br />
növekedést okoz<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Diagnózis<br />
A kimenetel korai felismerés<br />
A kiváltó ok sebészi megoldása<br />
Műtét során, vagy képalkotó<br />
eljárásvezérlésével perkután aspirációval<br />
nyert minta, és haemokultúra<br />
Kórokozó azonosítása<br />
Cél: segíteni a klinikust az empirikusan<br />
választott antibiotikum terápia célzottá<br />
tételében<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
14
Gondolat<br />
A jó anaerob diagnosztika<br />
kulcskérdései<br />
Adekvát helyről történő, megfelelő mintavétel<br />
Transzport<br />
(megfelelő tárolás)<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Laboratórium<br />
Az optimális anaerob bakteriológiai<br />
laboratóriumi diagnosztika feltételei<br />
Az alkalmatlan minták elutasítása<br />
Egyszerű, gyors diagnosztikai módszerek alkalmazása az<br />
anaerob baktériumok jelenlétének kimutatására<br />
Szelektív és differenciáló táptalajok használata, a gyors<br />
izolálás és preszumptív identifikálás érdekében<br />
A minta anatómiai helyének, a beteg <strong>klinikai</strong> státuszának<br />
megfelelő baktérium identifikálása<br />
Egyszerű, gyors ún. preszumptív diagnosztikai<br />
módszerek alkalmazása a baktériumok genus- egyes<br />
esetekben species szinten történő identifikálására<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
15
Mikor gondoljon a klinikus<br />
anaerob infekcióra?<br />
Bűzös, kellemetlen szag<br />
Redoxpotenciál –110mV alá csökken<br />
okai: mechanikus elzáródás, idegen test, lövedék, nekrotizált<br />
szövetek, roncsolt érpálya, periférikus keringési elégtelenség<br />
Jellegzetesen anaerob flórával rendelkező testtájról<br />
szennyeződés nagy hasi műtétek, nőgyógyászati<br />
műtétek, fogászati beavatkozások<br />
Földdel történő sérülések<br />
Emberi, állati harapások<br />
Aminoglikozid terápia hatástalan<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Mintavétel<br />
Általános alapelvek:<br />
aszepszis betartása<br />
megfelelő minta<br />
a normál flórával való kontamináció<br />
elkerülése<br />
oxigén expozíció elkerülése,<br />
minimálissá tétele<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
16
Abscessusok:<br />
Mintavételi módszerek<br />
aspirátum tűvel, fecskendőbe<br />
Ha a műtétileg feltárt és a tűvel való mintavétel kontaminált<br />
(kis mennyiségű minta 0,2 ml, v. megsértené az ép szövetet,<br />
(agy!) flexibilis katéterrel, v. közvetlenül fecskendőbe (tű<br />
nélkül)<br />
steril váltott tű szükséges, a mintát anaerob transzport<br />
üvegbe injektálni<br />
Mély sebek:<br />
a bőrfelszín megfelelő fertőtlenítése<br />
felszíni kaparékot elvetni, a mélyről származó alkalmas<br />
drainált minta: fecskendőbe leszívni, tampon: kontamináció!<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Műtét közben vett minták<br />
Kiváló! (sterilitás, normál flórával való kontamináció<br />
elkerülése)<br />
kb. 5 ul szövetváladék, ami reprezentálja az<br />
infekció helyét, (nekrotikus v. gangrénás szövet,<br />
abscessus fal stb.) közvetlenül az anaerob<br />
transzport közegbe<br />
nagyobb mennyiséget (>1 ml) lehet steril Petricsészében<br />
v. steril vizelettartályban beküldeni, ha a<br />
laboratórium 1-2 órán belül feldolgozza<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
17
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Transzport<br />
a mintát védeni kell az oxigén káros hatásától<br />
a mintavételtől a feldolgozásig<br />
a jó anaerob transzport közegben a<br />
baktériumok néhány napig életben maradnak,<br />
a minta természetétől függően<br />
a purulens minták redukáló összetevőket<br />
tartalmaznak védik a mintát<br />
a minta mennyisége:nagyobb mennyiségű<br />
minták alkalmasabbak az anaerobok<br />
túlélésére<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
18
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Identifikációs szintek<br />
I. szint:<br />
Az összes laboratórium számára elérhetővé kell<br />
tenni: izolálás, színtenyészet nyerése, fenntartása,<br />
beküldése anaerob referencia laboratóriumba<br />
II. szint:<br />
Egyszerű, gyors, könnyen kivitelezhető tesztek<br />
alapján legalább genus szinten történő identifikálás<br />
III. szint:<br />
A legmodernebb diagnosztikai és molekuláris<br />
biológiai módszereket is felhasználja<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
19
Leoltás<br />
Chamberen belül: anaerob körülmények<br />
15’ en belül anaerob körülmények<br />
Mindig az aerob leoltással együtt<br />
Homogenizálni-Vortex<br />
Szövetdarab-homogenizátum<br />
Tamponos minta-folyékony PRAS-úgy kezelni,<br />
mintha folyékony minta lenne<br />
1 csepplemez, ha purulens<br />
2-3 csepplemez, ha híg<br />
1 csepp Gram-festésre<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
A <strong>klinikai</strong> minták feldolgozása és az izolálási<br />
módszerek<br />
Kezdő izolálási módszerek<br />
Minta<br />
Közvetlen vizsgálat Folyékony dúsító<br />
makroszkópos mikroszkópos<br />
Oxigén inkubáció<br />
EO, Endo, MacConkey,<br />
Sabouraud<br />
Tenyésztés szilárd táptalajokon<br />
Anaerob inkubáció<br />
Anaerob VA,BBE<br />
KVLB,PEA (EYA)<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Holman, Thyoglicolát<br />
CO 2 inkubáció<br />
VA, Csokoládé agar<br />
20
Inkubálás<br />
3-4 szegment izolált<br />
telepek<br />
JAR: min. 48 óra múlva<br />
Chamber: 24 óra múlva rá lehet nézni, úgy<br />
hogy csak az adott lemezt vesszük ki<br />
Min. 7 napig folyékony<br />
levesre naponta ránézni!!!<br />
Nem szabad csak folyékony dúsítót<br />
használni!!!!<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Az anaerob tenyésztési technikák I.<br />
Régi, hagyományos módszerek<br />
(lúgos pirogallol, Fortner-féle eljárás)<br />
Anaerob „jar”-ok, boxok, pakk-ok<br />
Kevesebb számú minta, kis helyigény, egyszerűség.<br />
Hátránya: robbanásveszélyes, nem evakuálható, a képződött<br />
pára lecsapódik a lemezekre, így a telepek összefolyhatnak.<br />
Csak egyszerre lehet kivenni a lemezeket.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
21
Az anaerob tenyésztési<br />
technikák II.<br />
Anaerob chamber-ek<br />
Nagyobb mennyiségű minták, automatizált<br />
gázszabályozás, a minta teljes feldolgozása is<br />
megtörténhet benne. Kiváló az anaerob<br />
kutatómunkára. Már 24 óra múlva meg lehet<br />
vizsgálni a lemezeket (gyorsabban növő anaerobok<br />
pld. clostridiumok). Hátránya: ára.<br />
Csak folyékony kultúra használata: tilos!! (kivétel<br />
haemokultúrák)<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
22
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
23
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
24
Az anaerob diagnosztikában alkalmazott<br />
táptalajok<br />
Alap, nem-szelektív, szelektív és differenciáló<br />
táptalajok együttes alkalmazása<br />
PRAS (paeredukált anaerob system)<br />
Brucella agar (BA) 5% birkavérrel, heminnel és K1<br />
vitaminnal kiegészítve<br />
Bacteroides-Bile-esculin agar (BBE)<br />
Kanamycin-vancomycin laked blood agar (KVLB)<br />
Phenyl-etyl alkoholos agar (PEA)<br />
Folyékony dúsító táptalaj<br />
Tojás agar (EYA)<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Az identifikálás lehetőségei<br />
Hagyományos biokémiai módszerek: (Gold standard)<br />
házi, vagy gyári készítmények, VPI Manual<br />
nem megbízhatóak, lassú növekedés, aszaccharolítikus aktivitás,<br />
pontos pH meghatározás, egyéb kiegészítő módszereket is igényel,<br />
a biokémiai eredmények interpretációja szubjektív<br />
Preszumptív identifikáció:<br />
gyors, egyszerű költségkímélő módszerek, rutin laboratóriumok<br />
számára elengedhetetlen<br />
Preformált enzimek kimutatásán alapuló gyors gyári kit-ek<br />
ATB, VITEK, REMEL, Rosco, Chrystal stb...<br />
Gáz-folyadék kromatográfia<br />
gyors megbízható módszer, de műszerigényes<br />
Molekulárdiagnosztikai módszerek<br />
16S rRNS génszakasz szekvencia analízisén alapuló módszerek,<br />
főleg kutató- és referencia laboratóriumok számára ajánlott<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
25
Kataláz Spot indol<br />
Nitrát<br />
+ +(Zn) -(Zn)<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
+ + -<br />
Gyári identifikáló rendszerek<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
26
P. acnes<br />
GLC<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Clostridium difficile<br />
Bacteroides törzsek 16S rDNA<br />
PCR-RFLP profilja<br />
HpaII TaqI<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
27
Sikeres együttműködés:<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
Köszönöm a figyelmüket!<br />
SOTE, Budapest, 2006 március 24.<br />
28
Change language