Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
4.4.3.4. Szabadgyökfogó-kapacitás<br />
A biológiai minták szabadgyökfogó-kapacitásának jellemz<strong>és</strong>ét H2O2/OH·-luminolmikroperoxidáz<br />
rendszerben végeztük, a 4.2.4.1. pontban leírtak szerint. A<br />
vizsgálatokhoz 170 μl 10 mg/ml fehérjekoncentrációra beállított <strong>máj</strong>homogenizátumot,<br />
90 μl 10 mg/ml-es bélmucosa-homogenizátumot, 150 μl plazmát, 50 μl 1 mg/ml<br />
hemoglobin tartalmú vörösvértestet használtunk (14).<br />
4.4.3.5. Szabad szulfhidrilcsoport-koncentráció<br />
A szabad SH-csoportok (mmol/l) meghatározása Ellmann-reagens (5,5’-ditiobis-2-nitrobenzoesav)<br />
jelenlétében, Sedlak <strong>és</strong> Lindsay által módosított Ellmann-módszerével<br />
történt (192). 440 nm-en detektáltuk a keletkező 2-nitro-5-merkapto-benzoesavat.<br />
Standardként a redukált glutationt használtuk. Ezzel a módszerrel a szabad SHcsoportok<br />
együttesen kerültek meghatározásra plazmában <strong>és</strong> 10 mg/ml fehérjetartalmú<br />
<strong>máj</strong>homogenizátumban.<br />
4.4.3.6. Malondialdehid-koncentráció<br />
A plazma <strong>és</strong> a <strong>máj</strong>homogenizátumok malondialdehid-koncentrációját Pyles<br />
módszerével határoztuk meg spektrofotometriásan (175). 150 μl 10 mg/ml-es<br />
fehérjekoncentrációjú <strong>máj</strong>homogenizátumhoz 350 μl Desferalt tartalmazó fiziológiás<br />
sóoldatot (5 μl Desferal + 345 μl fiziológiás sóoldat), majd 2 ml TBA-reagenst (40,5 ml<br />
20%-os ecetsav, 40,5 ml 0,8%-os tiobarbitursav, 13,2 ml 8,2 %-os lauril szulfát, 5,8 ml<br />
BDV/100 ml reagens) adtunk. Az elegyet 80 percig főztük, majd jeges vizes hűt<strong>és</strong>t<br />
követően 2 ml extrakciós oldattal (n-butanol:BDV:piridin, 15:3:1 arányú keverékével)<br />
elegyítettük. 3000 rpm-s 15 perces centrifugálást követően a felülúszó abszorbanciáját<br />
510, 532 <strong>és</strong> 560 nm-en határoztuk meg. A malondialdehid koncentrációt az alábbi<br />
egyenlet alapján számoltuk <strong>és</strong> mg/g fehérje-ben fejeztük ki:<br />
MDA532= 1,22 [A532-(0,56 x A510) + (0,44 x A560)]<br />
4.4.4. Szöveti minták elemtartalmának meghatározása<br />
Makro- <strong>és</strong> mikroelem meghatározást végeztünk szövetnedves <strong>máj</strong>homogenizátumból,<br />
plazmából <strong>és</strong> 1 mg/ml hemoglobin tartalmú vörösvértestből a 4.2.3.1. <strong>és</strong> 4.2.3.2.<br />
pontban leírtak alapján (204).<br />
52
Change language