Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
paramétereket diagnosztikus k<strong>és</strong>zletek (Dialab, Randox, Roche) segítségével a gyártó<br />
útmutatásai alapján.<br />
4.4.2.2. Glutation-peroxidáz meghatározása <strong>máj</strong>homogenizátumból <strong>és</strong><br />
vörösvértestből<br />
A glutation peroxidáz meghatározása patkány <strong>máj</strong>homogenizátumból <strong>és</strong> vörösvértesthemolizátumból<br />
történt Paglia <strong>és</strong> Valentine módszere alapján (166), Randox<br />
diagnosztikus k<strong>és</strong>zlet segítségével, a gyártó útmutatója alapján. A meghatározás<br />
lényege: a glutation peroxidáz, foszfát pufferben (pH 7,2), a glutationt kumén<br />
hidroperoxid segítségével oxidálja. A glutation reduktáz az oxidált glutationt NADPH<br />
jelenlétében azonnal visszaredukálja, melyet NADPH → NADP + átalakulás kísér. Az<br />
abszorbancia-csökken<strong>és</strong> mér<strong>és</strong>e 340 nm-en történt. A 10 mg/ml-es szérum marha<br />
albuminra beállított <strong>máj</strong>homogenizátum centrifugálását 10 percen át 4000 rpm-en<br />
végeztük, majd ezt követően a tiszta felülúszó oldatot leszívtuk. Az enzimmeghatározást<br />
ebből a tiszta oldatból végeztük.<br />
4.4.2.3. Szuperoxid-dizmutáz meghatározása <strong>máj</strong>homogenizátumból <strong>és</strong> vörösvértestből<br />
A biológiai minták szuperoxid-dizmutáz (SOD) meghatározása Randox diagnosztikus<br />
k<strong>és</strong>zlet segítségével, a gyártó útmutatója alapján történt. A módszer lényege: a xantin <strong>és</strong><br />
xantin-oxidáz reakciója során keletkező O2 -• reakcióba lép a 2-(4-jodofenil)-3-(4nitrofenol)-5-feniltetrazolium<br />
kloriddal, melynek során vörös színű formazán<br />
keletkezik. A SOD fenti reakciót gátló hatását mértük 505 nm-en. A meghatározás<br />
vörösvértestből <strong>és</strong> 10 g/ml-es <strong>máj</strong>homogenizátumból a 4.3.2.2. pontban leírtak szerint<br />
előállított tiszta felülúszóból történt.<br />
4.4.2.4. Enzim meghatározások <strong>máj</strong>mikroszómából<br />
4.4.2.4.1. Citokróm-P450-tartalom meghatározása<br />
A meghatározást Greim (84) módszerével végeztük. A mikroszóma frakciót CO-dal<br />
telítettük, majd Na-ditionittal redukáltuk. A 400-500 nm közötti tartományban a Naditionit<br />
nélküli (vak) <strong>és</strong> a Na-ditionitot tartalmazó minták differencia spektrumát<br />
regisztráltuk. A koncentrációt a 450 <strong>és</strong> 490 nm-en kapott abszorbancia értékek<br />
különbsége alapján, 91 mM -1 cm -1 extinkciós koefficiens segítségével számoltuk. A<br />
mér<strong>és</strong>t Hitachi U-3300 spektométerrel végeztük.<br />
49
Change language