Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
A kísérletek során az állatok ellátása <strong>és</strong> gondozása „Az állatok védelméről <strong>és</strong><br />
kímél<strong>és</strong>éről” c. 1998. évi XXVIII. Törvény által előírtakkal összhangban történt.<br />
Engedély számok: TUKEB 186/1998, TUKEB 175/1998, TUKEB 69/2000.<br />
Metabolikus dózis-számítás<br />
A Metabolikus dózis-számítás vonatkoztatási alapját a testfelület adja. Az emlősök<br />
testfelülete egyenesen arányos az anyagcsere-testmérettel (MBS-Metabolic Body Size),<br />
mely az élő tömeg 0,75-dik hatványa: F (dm 2 ) = 10 x S 0,75 (kg)<br />
A Detralex három dózisával dolgoztunk: a terápiás dózist (2 tabletta/nap), valamint a<br />
terápiás dózis ötszörösét <strong>és</strong> hétszeresét alkalmaztuk. Az embernél alkalmazott dózis<br />
patkányra számolásánál az 1 testtömeg kg-ra megadott mennyiséget szoroztuk 4,3-mal,<br />
<strong>és</strong> elosztottuk a patkány tömegével (111).<br />
4.4.1. Biológiai minták elők<strong>és</strong>zít<strong>és</strong>e<br />
4.4.1.1. Májhomogenizátum k<strong>és</strong>zít<strong>és</strong>e<br />
Kísérleteinkben 190-210 g-os hím Wistar patkányokat <strong>és</strong> 160-180 g nőstény Wistar<br />
patkányokat alkalmaztunk. Az állatok vena cava posterior kanülálásán keresztüli<br />
kivéreztet<strong>és</strong>ét követően, az eltávolított <strong>máj</strong>akat jeges hűt<strong>és</strong> mellett további aprítással <strong>és</strong><br />
izotóniás KCl oldattal tisztítottuk meg, majd Potter-Elvehjem k<strong>és</strong>zülékben<br />
homogenizáltuk. A <strong>máj</strong>homogenizátumok fehérjetartalmát 10 mg/ml-re állítottuk be<br />
izotóniás KCl-oldattal.<br />
4.4.1.2. Májmikroszóma izolálása<br />
A mikroszóma preparálása Cinti <strong>és</strong> mtsai (44) módszere alapján történt. A módszer<br />
lényege: a szöveti homogenizátumból az endoplazmás retikulum (mikroszóma frakció)<br />
aggregálódik Ca 2+ -ionnal. A fent említett módon eltávolított <strong>máj</strong>ak nagy lebenyeiből<br />
(lobus sinister lateralis) kimetszett 1 g-os darabot desztillált vízzel vérmentesre mostuk,<br />
majd – 20 ºC-on megfagyasztottuk. Kiolvadást követően 1 g <strong>máj</strong>at 2 ml 1,15% KCl-Tris<br />
pufferben (pH 7,4) homogenizáltunk, majd 9000 g-n 15 percig, 0 ºC-on centrifugáltuk.<br />
A felülúszó 1,25 ml-éhez 8 ml CaCl2-t adtunk, ezt követően 20000 g-n, 15 percig, 0 ºCon<br />
centrifugáltuk. A mikroszómát 4 ml KCl-Tris pufferben homogenizáltuk.<br />
47
Change language