Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...

4.3.3. Lymphocyták blasztosodásának vizsgálata
A szuszpenziót lapos aljú titrációs lemezek egy-egy rezervoárjába pipettáztuk, 4-4
párhuzamos kultúrát készítve. A fitohemagglutinint (PHA) 5 és 10 μl/ml és pokeweed
mitogént (PWM) 5 μl/ml dózisban adtuk a sejtekhez. Lektin nélküli kontrollkultúrákat
minden vizsgálatnál külön inkubáltunk. A tálcákat 37 ˚C-on 72 órán át 5% CO2 tartalmú
nedves atmoszférában helyeztük el. Nyolc órával a befejezés előtt a kultúrákat 0,5 μCi
[ 3 H]-timidinnel 24 óráig jeleztük. A sejteket szűrőpapírkorongra szűrtük Dynatech
készülékkel. Az izotóp aktivitást folyadékszcintillációs számlálóban (Nuclear Chicago,
Isocap 300, USA) határoztuk meg. Az eredményeket percenkénti beütésszámban (cpm)
fejeztük ki, négy párhuzamos kultúra átlagértékét véve figyelembe (82).
4.4. In vivo vizsgálatok
Állatkísérleteinkben összesen (előkísérletekkel együtt) 169 hím és 120 nőstény Wistar
albino patkánnyal végeztünk vizsgálatokat, melyeket a TOXICOOP-tól szereztünk be.
Eltérő eredetű májkárosodások állatkísérletes modelljein, a természetes eredetű
hatóanyagok hatásmechanizmus, ill. hatásspektrum tanulmányozását folytattuk számos,
a szervezet antioxidáns – szabad gyök egyensúlyát vizsgáló módszer alkalmazásával.
Májkárosodást étrendi úton (zsírdús diéta) és hepatotoxikus vegyszerrel
(tioacetamiddal) idéztünk elő. A kontrollcsoportba tartozó állatok standard tápot (Ssniff
R-Z, Ssniff Spezialdiäten GmbH, Németország) kaptak. A zsírdús diéta, melyet
hiperlipémia kialakulása érdekében adtunk az állatoknak, standard táphoz kevert 2%
koleszterint, 0,5% kólsavat és 20% napraforgóolajat tartalmazott. A hatóanyagokat
itatóvízbe, tápba keverve vagy gyomorszondán keresztül juttattuk be az állatokba. A
dózis számolás a metabolikus index alapján történt. Az állatokat mély narkózisban a
vena cava kanülálásával elvéreztettük és szerveiket a vizsgálatokhoz előkészítettük. A
vért a további vizsgálatokhoz vákuumcsövekben felfogtuk. Narkotikumként 35 mg/ttkg
i.p. Nembutalt alkalmaztunk. Az állatok testtömegét naponta mértük és rögzítettük.
A kezelések további részletezését az ’Eredmények’ adott fejezeteiben ismertetem,
tekintettel a kísérleti protokollok jelentős eltéréseire.
Az állatokat a Semmelweis Egyetem II. Anatómiai, Szövet- és Fejlődéstani Intézet
állatházában tartottuk és kezeltük.
46