Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
komplexképző vegyületek (pl. EDTA) a fémionokat kiszorítják a komplexből. A<br />
reakció során kialakult komplex vegyület maximumhelye a vizsgált komplexképző<br />
anyag koncentrációjától <strong>és</strong> erősségétől függően 485 nm-től 530 nm felé tolódik el. A<br />
komplexképző aktivitást a két hullámhosszon mért abszorbanciaérték hányadosával<br />
fejeztük ki (Abs485/Abs530). A kontroll, mely nem tartalmaz komplexképző vegyületet, a<br />
legmagasabb értéket adta.<br />
4.2.4.5. Totál antioxidáns státusz<br />
A meghatározás metmioglobinból hidrogén peroxid hatására keletkező ferrimioglobin<br />
gyök <strong>és</strong> egy kromogén vegyület, a 2,2-azinobisz-(3-etilbenzotiazolin-6-szulfonsav)<br />
(ABTS) reakcióján alapszik. A reakció eredményeként kékeszöld színű ABTS ·+ gyök<br />
keletkezik, mely 660 nm-en detektálható. Antioxidáns hatású vegyületek a<br />
ferrimioglobin gyök befogása révén, meggátolják a színes ABTS ·+ gyök képződ<strong>és</strong>ét,<br />
csökkentve a mérhető abszorbancia értékét. Standard vegyületként Trolox-ot<br />
(szintetikus E-vitamin származék; 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilkromán-2-karboxilsav)<br />
használtunk. A meghatározásokat a Randox által forgalmazott TAS diagnosztikai<br />
k<strong>és</strong>zlettel végeztük COBAS MIRA automata laboratóriumi analizátor segítségével.<br />
4.3. Humán in vitro vizsgálatok<br />
4.3.1. Minta-elők<strong>és</strong>zít<strong>és</strong><br />
A minták (Hibiscus sabdariffa szárított cs<strong>és</strong>zelevelei, Beiquishen tea) mindegyikéből<br />
1-1 g-ot alufóliázott Erlenmeyer lombikokba helyeztünk, felöntöttük 100 ml forrásban<br />
lévő bidesztillált vízzel, lefedtük, majd 15 percet követően a mintákat leszűrtük, a<br />
szürletet bidesztillált vízzel 100 ml-re kieg<strong>és</strong>zítettük. Ezt követően fiziológiás sóoldattal<br />
10x-, 100x- <strong>és</strong> 1000x-es hígításokat végeztünk.<br />
4.3.2. Lymphocyta szeparálása<br />
A lymphocytákat 17 eg<strong>és</strong>zséges donor perifériás vénás kering<strong>és</strong>éből származó,<br />
heparinnal alvadásgátolt vérből, Ficoll-Paque gradiensen centrifugálással (2000 rpm; 10<br />
perc) szeparáltuk. A sejtek életképességét, mely 98%-nál nagyobb volt, tripánkékkel<br />
vizsgáltuk. Ezt követően a sejteket 10 % hőinaktivált fötális borjúszérumot, 25mM<br />
HEPES-puffert <strong>és</strong> antibiotikumokat tartalmazó RPMI 1640 tápfolyadékban<br />
reszuszpendáltuk <strong>és</strong> 2X10 6 sejt/ml tartalmú szuszpenziót k<strong>és</strong>zítettünk (23).<br />
45
Change language