Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
Természetes hatóanyagok jelentőségének vizsgálata máj- és ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
nem tartalmazó H2O2/OH·-luminol-mikroperoxidáz rendszer által emittált<br />
fénymennyiséghez (háttérfényhez) képest alacsonyabb fényintenzitást mértünk, melyet<br />
RLU (Relative Light Unit) %-ban fejeztünk ki.<br />
4.2.4.2. Hidrogén-donor aktivitás<br />
A hidrogén-donor aktivitást Hatano (90) által módosított Blois (19) módszerével 1,1difenil-2-<br />
pikrilhidrazil (DPPH) stabil, szabad gyök jelenlétében vizsgáltuk, melynek<br />
metanolos oldata 517 nm-en abszorbancia maximumot mutat. H-donor molekula<br />
jelenlétében az abszorbancia csökken. Mintaoldat (M): a drogok 10 mg/ml-es vizes<br />
oldatából hígítási sort k<strong>és</strong>zítettünk, az így nyert oldatok 4 ml-éhez 1 ml 9 %-os DPPH<br />
oldatot (9 mg DPPH 100 ml metanolos oldata) adtunk, majd összekever<strong>és</strong> után<br />
szobahőn inkubáltuk 30 percig. A minta vak oldat (MV) DPPH-t nem tartalmazott (4 ml<br />
minta + 1 ml víz). A kontrolloldat (K) 4 ml vizet <strong>és</strong> 1 ml DPPH oldatot foglalt magában.<br />
Az abszorbanciát metanol vakkal szemben 517 nm-en mértük. A legmagasabb<br />
abszorbancia értéket a kontrolloldat adta. A minta H-donor aktivitását a kontrollhoz<br />
viszonyítva, gátlás %-ban fejeztük ki.<br />
gátlás % = [K- (M - MV)] / K x 100<br />
4.2.4.3. Redukálóképesség<br />
A biológiai minták redukálóképességét a Fe (III) → Fe (II) átalakuláson alapuló, Oyaizu<br />
módszerrel határoztuk meg (164). A vizsgálati minták különböző koncentrációjú vizes<br />
oldatainak 1 ml-t elegyítettük 2,5-2,5 ml 0,2 M foszfát-puffer (pH=6,6) <strong>és</strong> 1%-os<br />
K3Fe(CN)6-oldat keverékével, majd 50 ºC-on 20 percig inkubáltuk. Ezt követően 2,5 ml<br />
10%-os triklórecetsav hozzáadása után 10 percig 3000 rpm-en centrifugáltuk. A<br />
felülúszóból 2,5 ml-t 2,5 ml bidesztillált vízzel (BDV) <strong>és</strong> 0,5 ml friss 0,1 %-os FeCl3oldattal<br />
összeráztunk, majd 700 nm-n, vak oldattal szemben spektrofotometráltuk. A<br />
vakoldat annyiban különbözött a mintaoldattól, hogy a minta helyett azonos<br />
mennyiségű BDV-t használtunk. A minta redukálóképességét aszkorbinsavat (AS)<br />
ekvivalensben határoztuk meg, azaz megállapítottuk, hogy egységnyi mennyiségű minta<br />
hány μmol aszkorbinsav redukálóképességével egyenértékű.<br />
4.2.4.4. Komplexképző aktivitás<br />
A minták komplexképző aktivitását Shimada módszere alapján (196) határoztuk meg. A<br />
módszer lényege, hogy a réz (II)-ionok hexamin pufferben tetrametilmurexid<br />
jelenlétében 485 nm-en abszorbanciamaximumot adnak. A hexaminnál erősebb<br />
44
Change language