az értekezés - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola

elválasztásához használt HPLC összeállítása: Jasco PU-980 Intelligent HPLC pumpa,
Rheodyne 7725i injektor és Jasco UV-975 Intelligent UV/VIS detektor. Állófázis:
Hypercarb (100 x 4,6 mm, 5 μm) oszlop (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA,
Amerikai Egyesült Államok). A HPLC elválasztás körülményei: a vizsgálati anyagok
törzsoldatai 1 mg vizsgálati anyag 10 ml acetonitrilben való oldásával készültek. Injektált
térfogat: 20 μl. Mozgófázis: metanol 43 v/v%; acetonitril 17 v/v%; vizes ammónium-acetát
/ ammónia puffer (pH = 9,2) 40 v/v%. Ammónium-acetát koncentrációja: 0,1 mol x dm -3 .
Az elválasztáshoz izokratikus áramlást alkalmaztunk. Az eluens áramlási sebessége: 1,5 ml
x perc -1 . Az UV/VIS detektor hullámhosszát 220 nm-re állítottuk. Az elválasztás 25 °C-ra
temperált rendszerben történt. A holtidő (tR) a vizsgálati anyag törzsoldatának
oldószerjelének megjelenéséig az injektálás óta eltelt idő. A kromatogramokat Borwin
kromatográfiás szoftver (v. 1.21) segítségével rögzítettük. A retenciós időket a 7. Európai
Gyógyszerkönyv definíciói szerint számoltuk. Vékonyréteg-kromatográfia: Állófázisként
Merck Silica Gel 60 F254 lemezt használtunk. Mozgófázis A (szulfátészterek): butan-1-ol
45 v/v%; aceton 15 v/v%; tömény ecetsav 10 v/v%; víz 20 v/v%.Mozgófázis B
(glükozidok): víz 10 v/v%; metanol 25 v/v%; tömény ecetsav 25 v/v%; diklóretán 40 v/v%.
Glükozidok esetében az alábbi előhívó-reagenssel permeteztük a lemezt kifejlesztés és
szárítás után: timolt (0,5 g) tömény kénsav (5 ml) és abszolút etanol (95 ml) elegyében
oldottunk. Permetezés után 130 °C-n 15 percig hevítettük a lemezeket.
42