thèse de doctorat d'université biologie - Portail national SIST
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18<br />
Prélèvement d’une pièce <strong>de</strong> tissu <strong>de</strong> gona<strong>de</strong> sur matériel fiais<br />
Solution <strong>de</strong> glutaral<strong>de</strong>hy<strong>de</strong>:<br />
(Pm= 100) diluée à 3%; PH = 7,8; Molarité = 1100 mOs<br />
Post fixation du tissu<br />
Elle est réalisée la veille et dure lh.<br />
Produits utilisés et quantités :<br />
1 volume d’osmium à 4% (80m OsM) + 1 volume <strong>de</strong> Nacl à 10% + 1 volume d’eau distulléej<br />
Lavage<br />
Remplacement du bain d’osmium par un tampon <strong>de</strong> cacodylate (0,4M; pH =: 7,3:<br />
molarité 700m OsM et 1 100 final)<br />
Rinçage en 2 bains <strong>de</strong> 2Omn chaque.<br />
Echantillons ensuite gardés au froid à 4’C<br />
Déshydratation a la temp&ature ambiante dans <strong>de</strong> l’alcool éthylique <strong>de</strong> <strong>de</strong>gre croissant<br />
- alcool 50’ : 1 bain <strong>de</strong> 5 à lomn<br />
-alcool75’: lbain<strong>de</strong>5àlomn<br />
-alcool95’: 1 bain<strong>de</strong>5à 1Omn<br />
-alcool 100’:2à3bains<strong>de</strong>5a10mn<br />
Inclusion dans la résine Spurr<br />
Les &Aantillons déshydrates sont placés dans <strong>de</strong>s bains successifs <strong>de</strong> Spurr<br />
Réalisation <strong>de</strong> coupes semi-fines (coupes <strong>de</strong> 1 pm puis coloration)<br />
Confection <strong>de</strong> coupes ultrafines d’épaisseur 60 mn.<br />
7 , Préparation <strong>de</strong>s échantillons pour l’observation en microscopie<br />
électronique à transmission<br />
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