Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

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Modèles rongeurs de traumatisme de la moelle épinière (transsection, compression) avec greffe de cellules olfactives Rats et souris adultes sont anesthésiés par injection intra-péritonéale d’un mélange de kétamine (100 mg/kg) et de xylazine (10 mg/kg). La partie médiane du dos de l’animal est rasée et les poils sont éliminés avec une gaze humide. La peau est aseptisée avec de la betadine. Une incision longitudinale est effectuée avec un scalpel et la peau est écartée. Une seconde incision est effectuée dans la masse musculaire entre les niveaux thoraciques T6 et T10. A l’aide d’un écarteur, les muscles sont séparés afin d’exposer la colonne vertébrale. Une laminectomie est pratiquée au niveau T9. Une anesthésie locale est pratiquée en déposant 100 à 200 microlitres de xylocaïne sur la moelle exposée. Pour le modèle de compression, une sonde pourvue d’un ballonnet à son extrémité, est introduite entre la moelle et la colonne vertébrale de sorte que la ballonnet soit situé sous le niveau T8. Le ballonnet est gonflé à une pression de 5 atmosphères pendant 1 minute à l’aide d’une seringue contenant de l’eau et équipé d’un mesureur de pression. Au bout d’une minute, le ballonnet est dégonflé et retiré. Pour le modèle de transection, la moelle est incisée sur toute la largeur à l’aide d’un scalpel au niveau T9. Après la compression ou la transection, un morceau de Gelfoam est inséré au dessus de la moelle exposée puis les muscles et la peau sont suturés avec du fil stérile et résorbable en vicryl 3-0. La température de l’animal est vérifiée au cours de l’opération afin d’éviter une hypothermie. L’animal est ensuite placé seul dans une cage et est contrôlé attentivement jusqu’à ce qu’il retrouve sa vigilance. L’animal retourne ensuite en zone de stabulation (un animal par cage) pour une durée variant entre 4 et 16 semaines avant d’être sacrifié par injection d’une dose létale de pentobarbital sodique (120 mg/kg) en intra-péritonéal. Durant les quinze jours qui suivent l’opération, l’animal bénéficie de soins post-opératoires intensifs. L’animal est pesé tous les jours et, deux fois par jour, son urine est éjectée par une pression douce sur la vessie. Si l’urine montre des signes d’infection, une dose de terramycine (0,1 ml) est administrée en intrapéritonéal pendant 5 jours. Si l’animal exhibe des signes de souffrance, un traitement au BUPRECARE est administré. - Autres protocoles : Protocoles d’analyse du comportement Mesure de la récupération fonctionnelle après section du nerf péronier Mesure de l’empreinte du pas Les mesures de la longueur du pas (PL : print lenght) et de l’écartement des orteils entre le premier et le cinquième orteil (TS : toe spread) sont réalisées après imprégnation avec de l’encre indélébile des deux pattes arrières du rat. Nous avons utilisé la formule de l’index fonctionnel péronier de Bain-Mackinnon- Hunter en prenant les moyennes des valeurs du côté sain (N : normal) et du côté lésé (E : experimental) sur trois pas consécutifs sans arrêt. La formule s’écrit de la manière suivante : PFI(peroneal function index)= 174.9x[(EPL-NPL)/NPL] + 80,3x[(ETS-NTS)/NTS] - 13.4 Le score d’un animal sain s’établit à -13.4 Analyse cinématique de la marche : étude des amplitudes articulaires avec le logiciel SIMI motion® Cette étude nécessite au préalable le marquage au feutre indélébile de quatre points articulaires en regard de la hanche (trochantaris major), du genou (condylus lateralis), de la cheville (malleolus lateralis) et de la tête du cinquième métatarsien de la patte arrière gauche. L’enregistrement vidéo permet l’analyse du déplacement en 2D des 4 points sur 3 pas consécutifs sans arrêt. Le logiciel SIMI motion® traite les données sur chacune des 50 acquisitions par seconde et détermine les courbes des angles du genou et de la cheville au cours du déplacement. Nous avons étudié les amplitudes des angles de dorsiflexion de la cheville et de flexion du genou pendant la phase de balancé, les valeurs de l’angle de dorsiflexion de la cheville au milieu (mid swing) et en fin de la phase de balancé (terminal swing). Mesure de la récupération fonctionnelle après section ou compression de la moelle épinière Mesure de la locomotion et de la démarche On utilise le test BBB. Les animaux sont placés dans un openfield et observés pendant 4 minutes. Les principales mesures concernent le mouvement de chacune des articulations des pattes inférieures, la capacité de l’animal à supporter son poids et la démarche de l’animal lorsque celui-ci parvient à se tenir sur ses pattes postérieures. Chaque animal se voit attribuer un nombre de points variant entre 0 et 21. Chaque animal est testé une fois par semaine sur des périodes allant de 12 à 36 semaines. Mesure de la nage 96
L’animal est placé dans un couloir de nage en verre, suffisamment étroit pour qu’il ne puisse revenir à sa plateforme d’origine. L’animal est filmé et le mouvement de la patte est ensuite analysé avec le logiciel SIMI motion® décrit plus haut. Comportement sur une échelle inclinée L’animal est placé sur une échelle horizontale. Cette dernière est ensuite progressivement élevée à l’une de ses extrémités jusqu’à atteindre l’angle de 55°. Lorsque l’échelle est inclinée de la sorte, l’animal ne peut tenir agrippé à l’échelle avec la seule force de ses pattes antérieures. Il a besoin de l’aide de ses pattes postérieures pour pouvoir se maintenir sur les barreaux. Mesure de la paralysie induite par l’injection d’un peptide myélinique (modèle EAE de sclérose en plaques) Un cocktail contenant de l’adjuvant de Freund, la mycobactérie tuberculosis, le peptide MOG (Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein) est injecté en sous cutané, au niveau de la nuque. Les premiers signes cliniques sont observés 2 à 3 semaines après l’injection. L’échelle d’évaluation comprend six stades. Les animaux sont observés quotidiennement dans un openfield pendant 40 jours. 0 Pas de symptômes 1 Queue flaccide 2 Faiblesse du train arrière (mais plie les 2 pattes) Démarche surbaissée 2,5 Faiblesse du train arrière (mais plie les 2 pattes) Démarche surbaissée Perte d’équilibre ou tremblement (« tangue ») 3 Paralysie partielle du train arrière (plie 1 patte, l’autre « traîne ») 4 Paralysie totale du train arrière 5 Paralysie totale du train arrière Troubles sphinctériens Hémorragies oculaires, nasales, etc. Parésie ou paralysie partielle ou totale des pattes avant 5,5 Stade moribond sans mort immédiate 6 Stade moribond sans mort immédiate Préciser les espèces utilisées pour les animaux suivants : -Primates non humains : -Autres carnivores domestiques : -Autres rongeurs : rats et souris -Autres lagomorphes : -Autres oiseaux : -Reptiles : -Autres amphibiens : -Poissons : Préciser les autres espèces utilisées, mentionnées dans la dernière colonne du tableau : 97
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SOMMAIRE Identification de l’éta
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Décrire de façon précise les pro
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FICHE DE RENSEIGNEMENTS SUR LES PRO
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ANIMAUX TRANSPORTS SERVICES (ATS) 3
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