Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

Modèles rongeurs de traumatisme de la moelle épinière (transsection, compression) avec greffe de cellules
olfactives
Rats et souris adultes sont anesthésiés par injection intra-péritonéale d’un mélange de kétamine (100
mg/kg) et de xylazine (10 mg/kg). La partie médiane du dos de l’animal est rasée et les poils sont éliminés
avec une gaze humide. La peau est aseptisée avec de la betadine. Une incision longitudinale est effectuée
avec un scalpel et la peau est écartée. Une seconde incision est effectuée dans la masse musculaire entre les
niveaux thoraciques T6 et T10. A l’aide d’un écarteur, les muscles sont séparés afin d’exposer la colonne
vertébrale. Une laminectomie est pratiquée au niveau T9. Une anesthésie locale est pratiquée en déposant
100 à 200 microlitres de xylocaïne sur la moelle exposée. Pour le modèle de compression, une sonde
pourvue d’un ballonnet à son extrémité, est introduite entre la moelle et la colonne vertébrale de sorte que
la ballonnet soit situé sous le niveau T8. Le ballonnet est gonflé à une pression de 5 atmosphères pendant 1
minute à l’aide d’une seringue contenant de l’eau et équipé d’un mesureur de pression. Au bout d’une
minute, le ballonnet est dégonflé et retiré. Pour le modèle de transection, la moelle est incisée sur toute la
largeur à l’aide d’un scalpel au niveau T9.
Après la compression ou la transection, un morceau de Gelfoam est inséré au dessus de la moelle exposée
puis les muscles et la peau sont suturés avec du fil stérile et résorbable en vicryl 3-0. La température de
l’animal est vérifiée au cours de l’opération afin d’éviter une hypothermie. L’animal est ensuite placé seul
dans une cage et est contrôlé attentivement jusqu’à ce qu’il retrouve sa vigilance. L’animal retourne
ensuite en zone de stabulation (un animal par cage) pour une durée variant entre 4 et 16 semaines avant
d’être sacrifié par injection d’une dose létale de pentobarbital sodique (120 mg/kg) en intra-péritonéal.
Durant les quinze jours qui suivent l’opération, l’animal bénéficie de soins post-opératoires intensifs.
L’animal est pesé tous les jours et, deux fois par jour, son urine est éjectée par une pression douce sur la
vessie. Si l’urine montre des signes d’infection, une dose de terramycine (0,1 ml) est administrée en
intrapéritonéal pendant 5 jours. Si l’animal exhibe des signes de souffrance, un traitement au
BUPRECARE est administré.
- Autres protocoles : Protocoles d’analyse du comportement
Mesure de la récupération fonctionnelle après section du nerf péronier
Mesure de l’empreinte du pas
Les mesures de la longueur du pas (PL : print lenght) et de l’écartement des orteils entre le premier et le
cinquième orteil (TS : toe spread) sont réalisées après imprégnation avec de l’encre indélébile des deux
pattes arrières du rat. Nous avons utilisé la formule de l’index fonctionnel péronier de Bain-Mackinnon-
Hunter en prenant les moyennes des valeurs du côté sain (N : normal) et du côté lésé (E : experimental)
sur trois pas consécutifs sans arrêt. La formule s’écrit de la manière suivante :
PFI(peroneal function index)= 174.9x[(EPL-NPL)/NPL] + 80,3x[(ETS-NTS)/NTS] - 13.4
Le score d’un animal sain s’établit à -13.4
Analyse cinématique de la marche : étude des amplitudes articulaires avec le logiciel SIMI motion®
Cette étude nécessite au préalable le marquage au feutre indélébile de quatre points articulaires en regard
de la hanche (trochantaris major), du genou (condylus lateralis), de la cheville (malleolus lateralis) et de la
tête du cinquième métatarsien de la patte arrière gauche. L’enregistrement vidéo permet l’analyse du
déplacement en 2D des 4 points sur 3 pas consécutifs sans arrêt. Le logiciel SIMI motion® traite les
données sur chacune des 50 acquisitions par seconde et détermine les courbes des angles du genou et de la
cheville au cours du déplacement. Nous avons étudié les amplitudes des angles de dorsiflexion de la
cheville et de flexion du genou pendant la phase de balancé, les valeurs de l’angle de dorsiflexion de la
cheville au milieu (mid swing) et en fin de la phase de balancé (terminal swing).
Mesure de la récupération fonctionnelle après section ou compression de la moelle épinière
Mesure de la locomotion et de la démarche
On utilise le test BBB. Les animaux sont placés dans un openfield et observés pendant 4 minutes. Les
principales mesures concernent le mouvement de chacune des articulations des pattes inférieures, la
capacité de l’animal à supporter son poids et la démarche de l’animal lorsque celui-ci parvient à se tenir
sur ses pattes postérieures. Chaque animal se voit attribuer un nombre de points variant entre 0 et 21.
Chaque animal est testé une fois par semaine sur des périodes allant de 12 à 36 semaines.
Mesure de la nage
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