Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

ensuite disséqué à l'intérieur du tronc commun sciatique afin de disposer d'une longueur suffisante pour
réaliser aisément la réparation nerveuse. Le nerf péronier dégagé innerve le muscle Tibialis anterior.
Un segment de nerf péronier de 1 cm est sectionné et est remplacé par un tube de 1 cm. Les extrémités
distale et proximale du nerf sont insérées sur 1 mm dans chaque extrémité du tube. Les épinèvres des
extrémités nerveuses sont suturées aux extrémités du tube préalablement imbibé de sérum physiologique.
Cette procédure permet de ramollir les parois du tube, ce qui facilite sa manipulation et sa mise en place.
Le groupe contrôle est composé de rongeurs dont le segment nerveux est inversé et immédiatement remis
en place en suturant en 5 points les épinèvres de chaque extrémité du segment nerveux prélevé avec celles
des troncs distal et central (fil Ethilon® 10/0, 200 microns).
L’analgésie est assurée par une injection sous cutanée de BUPRECARE à la dose de 0.02 à 0.5 mg/kg pour
le rat et 0.5 à 2.5 mg/kg pour la souris. Les injections se font toutes les 6 à 12 heures.
Pour tous les groupes expérimentaux, les plans musculaires de la patte sont suturés avec du fil vicryl 4/0 et
les plaies sont abondamment enduites de Cortiméga®, une pommade anti-inflammatoire et antibiotique.
Les animaux sont alors placés en ambiance chaude (37°C) jusqu'à leur réveil, puis placés dans des cages
individuelles où ils reçoivent de l'eau et de la nourriture ad libitum.
Dix semaines plus tard, les animaux sont de nouveau anesthésiés au pentobarbital sodique (Nembutal, 70
mg/kg). La trachée, la veine et l'artère poplitée controlatérales au nerf étudié sont canulées. L'animal est
réhydraté par une injection intraveineuse de sérum physiologique (1 ml/heure). Une pompe à respiration
artificielle (Harvard� Respiratory Pump), de volume et de fréquence variables, pouvant fonctionner sur
un mode automatique permet de ventiler l'animal qui est curarisé (Bromure de Pancuronium�, 10 mg/kg,
i.v). La patte gauche est incisée et le muscle Tibialis anterior est dégagé de son tissu conjonctif. La patte de
l'animal est solidement fixée à un support horizontal afin d'éviter tout mouvement au cours de la
stimulation électrique du muscle. Afin de mesurer la force de la contraction, l'extrémité distale du tendon
est attachée à une jauge de contrainte isométrique (Microdynamomètre, Ugo Basile).
Le muscle recouvrant le tronc commun sciatique est ensuite disséqué et le nerf péronier et son greffon sont
désolidarisés des tissus conjonctifs avoisinants. Après section dans la partie proximale du nerf, le nerf et le
greffon sont placés dans un bain de paraffine maintenu à la température de 37°C. La partie laissée libre
du nerf périphérique est placée sur une électrode bipolaire en tungstène afin de procéder à sa stimulation.
Après avoir rétracté les gaines conjonctives (épinèvre et périnèvre), de fins faisceaux de fibres nerveuses
sont obtenus par dilacération à l'aide de pinces fines (technique de la fibre unique : « teasing »). Un «
peigne d'électrodes » en tungstène, solidaire d'un micromanipulateur, permet d'enregistrer en condition
monopolaire l'activité électrique extracellulaire des fibres nerveuses. La pression artérielle, enregistrée à
l'aide d'un capteur (Gould, type N.A), est visualisée sur une autre voie de l'enregistreur. La température
centrale de l'animal est maintenue entre 37,5° et 39°C à l'aide d'une couverture chauffante asservie à une
sonde thermique rectale. A la fin de l’expérience, l’animal est sacrifié avec une dose létale de
pentobarbital.
L’analgésie est assurée par une injection sous cutanée de BUPRECARE à la dose de 0.02 à 0.5 mg/kg pour
le rat et 0.5 à 2.5 mg/kg pour la souris. Les injections se font toutes les 6 à 12 heures.
Protocole pour axotomie et bulbectomie
Rats et souris adultes sont anesthésiés par injection intra-péritonéale d’un mélange de kétamine (150
mg/kg) et de valium (3 mg/kg). L’animal est placé sur un appareil de stéréotaxie, maintenue par des
barres d’oreilles et par les dents. La partie supérieure du crâne est rasée et les poils sont éliminés avec une
gaze humide. La peau est aseptisée à la betadine. Une incision longitudinale est effectuée avec un scalpel et
la peau ainsi que le fascia sont écartés. La dure mère est éliminée par grattage avec une spatule et, quand
le bulbe olfactif apparaît par transparence, on marque l’emplacement avec un feutre. Pour une axotomie,
avec une perceuse portée à vitesse maximum, on perce la partie osseuse juste devant le bulbe olfactif puis
on enfonce une aiguille jusqu’au palais et par un mouvement horizontal on sectionne les afférences
nerveuses innervant la face antérieur du bulbe olfactif. Pour une bulbectomie, on élimine à la perceuse le
petit carré osseux recouvrant le bulbe olfactif qui est ensuite éliminé avec une spatule adaptée. La
température de l’animal est vérifiée au cours de l’opération afin d’éviter une hypothermie. Après la
dénervation, la peau de l’animal est suturée avec du fil stérile et résorbable en vicyl 3-0. L’animal est
ensuite placé seul dans une cage et est contrôlé attentivement jusqu’à ce qu’il retrouve sa vigilance et
notamment puisse se tenir debout. L’animal retourne ensuite en zone de stabulation (un animal par cage)
pour une durée variant entre 1 et 36 jours avant d’être sacrifié par injection d’une dose létale de
pentobarbital sodique (100 mg/kg) en intra-péritonéal.
L’analgésie est assurée par une injection sous cutanée de BUPRECARE à la dose de 0.02 à 0.5 mg/kg pour
le rat et 0.5 à 2.5 mg/kg pour la souris. Les injections se font toutes les 6 à 12 heures.
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