Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

Décrire de façon précise les protocoles suivants :
-Examens cliniques sur animaux anesthésiés :
- Prélèvement de substances sur animaux anesthésiés :
Protocole appliqué à des foetus
Culture de neurones de cortex ou d’hippocampe. Les mères gestantes sont profondément anesthésiées par
inhalation d’halothane. Après incision de l’abdomen (suivi de décapitation), le placenta est prélevé et
transféré dans un tampon glacé. Les embryons (au stade embryonnaires E17-18) sont alors prélevés,
décapités et les cerveaux prélevés.
Protocoles appliqués à des souriceaux de 3 à 6 jours.
Protocole 1 pour les cellules souches de la zone sous ventriculaire :
On décapite les souriceaux avec des ciseaux.
On prélève le cerveau uniquement pour en faire des coupes coronales au vibratome, puis on microdissèque
la SVZ sur ces coupes.
Protocole 2 pour les cultures d’astrocytes corticaux, de neurones de cervelet ou de cultures
organoytpiques d’hippocampe :
Les prélèvements des cerveaux se font ici 3-10 jours après la naissance sur les animaux anesthésiées et
décapités comme ci-dessus.
Protocoles appliqués à des rongeurs adultes.
Protocole 1 pour la biologie moléculaire :
On euthanasie les animaux par dislocation cervicale.
On coupe la tête aux ciseaux.
On prélève le cerveau, le cervelet et les bulbes olfactifs.
On ouvre l’abdomen et on prélève le foie, la rate, les reins, le thymus.
Puis on dégage la colonne vertébrale et on récupère la moelle épinière.
Tous les tissus sont ensuite fixés et congelés.
Protocole 2 pour l’immunohistochimie :
On anesthésie la souris par injection intrapéritonéale de pentobarbital sodique (70 mg/kg).
On ouvre la cage thoracique puis on dégage le cœur.
On insère une aiguille reliée au tuyau d’une pompe péristaltique dans le ventricule gauche.
On coupe l’oreillette droite, le sang est alors remplacé par la solution perfusée (PFA 4% ou PBS).
Ensuite on prélève le foie, la rate, les reins, le thymus, la moelle épinière et le cerveau.
Les organes sont congelés directement.
Protocole 3 pour la culture de cellules du système immunitaire :
On euthanasie les animaux par dislocation cervicale.
On ouvre l’abdomen et on prélève la rate que l’on dilacère pour récupérer les cellules sanguines.
Protocole 4 pour la culture de cellules du système olfactif :
Rats et souris sont euthanasiés par une overdose de pentobarbital sodique et la tête est isolée du reste du
corps. La muqueuse olfactive est exposée après élimination de la peau, des muscles de la face, des incisives
et de la mâchoire inférieure.
- Interventions chirurgicales :
Modèle rongeur de lésion du nerf péronier avec greffe de tuteur de repousse nerveuse
L'anesthésie générale des animaux (rats mâles Lewis ou Sprague Dawley) est obtenue par injection
intrapéritonéale de pentobarbital sodique (Nembutal®, 70 mg/kg). Une injection ip. d'atropine
(0.05mg/kg) permet de réduire les sécrétions dans les voies aériennes potentiellement obstructives.
L'animal étant placé en décubitus dorsal, des incisions cutanées et musculaires au niveau de la patte
postérieure gauche permettent d'accéder au nerf sciatique. La branche péronière (peroneus ou fibularis)
du tronc sciatique est dégagée des tissus avoisinants jusqu'à son point d'émergence du tronc commun
sciatique puis sectionnée dans sa partie médiane en deux points séparés de 1,5 cm. Le faisceau nerveux est
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