Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

de fréquence variables, pouvant fonctionner sur un mode automatique permet de ventiler
l'animal qui est curarisé (Bromure de Pancuronium, 10 mg/kg, i.v). La patte gauche est incisée
et le muscle Tibialis anterior est dégagé de son tissu conjonctif. La patte de l'animal est
solidement fixée à un support horizontal afin d'éviter tout mouvement au cours de la
stimulation électrique du muscle. Afin de mesurer la force de la contraction, l'extrémité
distale du tendon est attachée à une jauge de contrainte isométrique (Microdynamomètre, Ugo
Basile).
Le muscle recouvrant le tronc commun sciatique est ensuite disséqué et le nerf péronier et son
greffon sont désolidarisés des tissus conjonctifs avoisinants. Après section dans la partie
proximale du nerf, le nerf et le greffon sont placés dans un bain de paraffine maintenu à la
température de 37°C. La partie laissée libre du nerf périphérique est placée sur une électrode
bipolaire en tungstène afin de procéder à sa stimulation. Après avoir rétracté les gaines
conjonctives (épinèvre et périnèvre), de fins faisceaux de fibres nerveuses sont obtenus par
dilacération à l'aide de pinces fines (technique de la fibre unique : « teasing »). Un « peigne
d'électrodes » en tungstène, solidaire d'un micromanipulateur, permet d'enregistrer en
condition monopolaire l'activité électrique extracellulaire des fibres nerveuses. La pression
artérielle, enregistrée à l'aide d'un capteur (Gould, type N.A), est visualisée sur une autre voie
de l'enregistreur. La température centrale de l'animal est maintenue entre 37,5° et 39°C à
l'aide d'une couverture chauffante asservie à une sonde thermique rectale. A la fin de
l’expérience, l’animal est sacrifié avec une dose létale de pentobarbital.
Protocole pour axotomie et bulbectomie
Rats et souris adultes sont anesthésiés par injection intra-péritonéale d’un mélange de
kétamine (150 mg/kg) et de valium (3 mg/kg) dans la pièce de stabulation. L’animal
anesthésié (perte de réflexes) est ensuite amené dans la pièce de chirurgie et est placé sur un
appareil de stéréotaxie, maintenue par des barres d’oreilles et par la pièce de gueule. La partie
supérieure du crâne est rasée et les poils sont éliminés avec une gaze humide. La peau est
aseptisée à la betadine. Après une infiltration sous cutanée de xylocaïne une incision
longitudinale est effectuée avec un scalpel et la peau ainsi que le fascia sont écartés. Quand le
bulbe olfactif apparaît par transparence, on marque l’emplacement avec un feutre. Pour une
axotomie, avec une perceuse portée à vitesse maximum, on perce la partie osseuse juste
devant le bulbe olfactif puis on enfonce une aiguille jusqu’au palais et par un mouvement
horizontal on sectionne les afférences nerveuses innervant la face antérieur du bulbe olfactif.
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