Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2
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*Protocole 1 pour les cellules souches <strong>de</strong> la zone sous ventriculaire :<br />
On décapite les souriceaux avec <strong>de</strong>s ciseaux.<br />
On prélève le cerveau uniquement pour en faire <strong>de</strong>s coupes coronales au vibratome, puis on<br />
micro-dissèque la SVZ sur ces coupes.<br />
*Protocole 2 pour les cultures d’astrocytes corticaux, <strong>de</strong> neurones <strong>de</strong> cervelet ou <strong>de</strong> cultures<br />
organoytpiques d’hippocampe :<br />
Les prélèvements <strong>de</strong>s cerveaux se font ici 3-10 jours après la naissance sur les animaux<br />
anesthésiées et décapités comme ci-<strong>de</strong>ssus.<br />
Protocoles appliqués à <strong>de</strong>s rongeurs adultes.<br />
*Protocole 1 pour la biologie moléculaire :<br />
On euthanasie les animaux par dislocation cervicale.<br />
On coupe la tête aux ciseaux.<br />
On prélève le cerveau, le cervelet et les bulbes olfactifs.<br />
On ouvre l’abdomen et on prélève le foie, la rate, les reins, le thymus.<br />
Puis on dégage la colonne vertébrale et on récupère la moelle épinière.<br />
Tous les tissus sont ensuite fixés et congelés.<br />
*Protocole 2 pour l’immunohistochimie :<br />
On anesthésie la souris par injection intrapéritonéale <strong>de</strong> pentobarbital sodique à la dose <strong>de</strong> 70<br />
mg/kg.<br />
On ouvre la cage thoracique puis on dégage le cœur.<br />
On insère une aiguille reliée au tuyau d’une pompe péristaltique dans le ventricule gauche.<br />
On coupe l’oreillette droite, le sang est alors remplacé par la solution perfusée (PFA 4% ou<br />
PBS). Ensuite on prélève le foie, la rate, les reins, le thymus, la moelle épinière et le cerveau.<br />
Les organes sont congelés directement.<br />
*Protocole 3 pour la culture <strong>de</strong> cellules du système immunitaire :<br />
On euthanasie les animaux par dislocation cervicale.<br />
On ouvre l’abdomen et on prélève la rate que l’on dilacère pour récupérer les cellules<br />
sanguines.<br />
*Protocole 4 pour la culture <strong>de</strong> cellules du système olfactif :<br />
Rats et souris sont euthanasiés par une overdose <strong>de</strong> pentobarbital sodique et la tête est isolée<br />
du reste du corps. La muqueuse olfactive est exposée après élimination <strong>de</strong> la peau, <strong>de</strong>s<br />
muscles <strong>de</strong> la face, <strong>de</strong>s incisives et <strong>de</strong> la mâchoire inférieure.<br />
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