Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

Les animaux sont euthanasiés par dislocation cervicale après une surdose de pentobarbital
6%. Le cerveau, le cervelet et les bulbes olfactifs sont prélevés. Tous les tissus sont ensuite
congelés.
*Protocole 2 pour l’immunohistochimie : les animaux sont anesthésiés par injection intra
péritonéale de pentobarbital sodique à la dose de 70 mg/kg. Après thoracotomie et
dégagement du cœur, une solution de PFA 4% ou PBS est infusée pour fixer les tissus. Le
cerveau est ensuite prélevé.
*Protocole 3 pour la mise en culture de cellules neurales de rats ou de souris (normales ou
KO)
� Protocoles appliqués à des rongeurs périnataux
Cultures de cellules nerveuses de rats ou de souris (normales ou KO)
*A partir de fœtus (pour culture de neurones de cortex ou d’hippocampe). Les mères
gestantes sont profondément anesthésiées par inhalation d’halothane (Lab. Bellamon). Après
incision de l’abdomen (suivi de décapitation), le placenta est prélevé et transféré dans un
tampon glacé. Les embryons (au stade embryonnaires E17-18) sont alors prélevés et décapités
avant prélèvements du cerveau.
*A partir de nouveaux-nés.(pour cultures d’astrocytes corticaux, ou de neurones de cervelet)
Les prélèvements des cerveaux se font à 3 - 7 jours après la naissance sur les animaux
anesthésiées et décapités comme ci-dessus.
� Interventions chirurgicales :
� Protocole pour Infusion sous-cutanée par minipompe osmotique
Rats et souris adultes sont anesthésiés par injection intra-péritonéale d’un mélange de
kétamine (100 mg/kg) et de xylazine (10 mg/kg). Avant d’effectuer une incision de la peau au
niveau dorsal de l’animal (légèrement caudal du niveau des épaules), la peau est rasée et les
poils sont éliminés avec une gaze humide. La peau est aseptisée avec de la Bétadine. Le
matériel d’infusion chronique (Minipompe osmotique Alzet , USA) est inséré par l’incision et
la peau de l’animal est suturée avec du fil stérile et résorbable en vicryl 3-0. L’animal est
ensuite placé seul dans une cage et est surveillé jusqu’à ce qu’il retrouve sa vigilance.
L’animal retourne ensuite en zone de stabulation (un animal par cage) pour une durée variant
entre 1 et 42 jours avant d’être sacrifié par injection d’une dose létale de pentobarbital sodique
(120 mg/kg) en intra-péritonéal.
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